A fa kozo awe so wungo ti acide indole-3-propionique (IPA) so ayeke na yâ ti mênë ti azo so ayeke na kobela ti foie ayeke mingi pëpe. Na yâ ti étude so, a gi nda ti transcriptome nga na méthylome ti ADN na yâ ti aforoto so ayeke na kota terê na lege ti wungo ti IPA so ayeke na yâ ti mênë ti zo, nga na kua so IPA ayeke sara ti sara si a-hépatique stellate cellule (HSC) asara kua nzoni pëpe.
Na yâ ti étude ni, a mû azo 116 so ayeke na kobela ti diabète ti mara 2 (T2DM) pëpe (ngu ti ala ayeke 46,8 ± 9,3; IMC: 42,7 ± 5,0 kg/m2) so a sara opération na ala na Centre ti chirurgie bariatrique ti Kuopio (KOBS). A mû wungo ti IPA so ayeke na yâ ti mênë ti zo na lege ti chromatographie-masse ti ngu (LC-MS), a sara kua na mbeni ye so a iri ni Infinium HumanMethylation450 BeadChip. A sala kusala na a-cellule stellate ti foie ti zo (LX-2) ti sala na a-expérience na yâ ti a-in vitro.
IPA so ayeke na yâ ti mênë ti zo ague oko na fango na gigi agene so ayeke na yâ ti alege ti apoptose, ti mitophagie nga na ti sarango si zo angbâ na fini aninga na yâ ti foie. Gene ti AKT sérine/thréonine kinase 1 (AKT1) ayeke lani mbeni gene so ayeke sara kua mingi nga so ayeke na ngangu mingi na yâ ti a-image ti foie nga na aprofil ti méthylation ti ADN. IPA asala si apoptose alondo, a sala si pupu ti mitocondrie adë, na a gbian lege so acellule ayeke sala kusala na ni na lege so a gbian yâ ti salango ye ti agene so a hinga ni ti leke fibrose, apoptose, na fini ti acellule ti LX-2.
Tongana a mû ni kue, asango so afa so IPA ayeke na ngangu ti sava zo na alingbi ti sara si apoptose asi nga ti changé fä ti HSC ti gue na mbeni ndo so ayeke sara kua pëpe, na tongaso a yeke sara si a lingbi ti kanga lege na fibrose ti foie na lege so lo yeke kanga lege na HSC ti sara kua nga ti sara si a-mitocondrie asara kua nzoni.
Azo so ayeke na kobela ti métabolisme nga na azo so ayeke na kobela ti métabolisme ayeke sara si azo ayeke wara kobela ti foie gras (MASLD); kobela ni ayeke sara 25% ti si na 30% ti azo kue [1]. Kota ye so ayeke si na peko ti so zo awara kobela ti MASLD ayeke fibrose ti foie, mbeni ye so ayeke sara si zo ayeke bungbi lakue fibre extracellulaire (ECM) [2]. Akota cellule so ayeke na yâ ti kobela ti foie ayeke a-hépatique stellate (HSC), so ayeke fa na gigi mara ti aye osio so azo ahinga ni: so ayeke duti kpô, so ayeke sara kua, so ayeke sara kua pëpe nga na so ayeke ga mbakoro [3, 4]. A lingbi ti sara si a-HSC asara kua nga ti sara si a-HSC ni aga a-cellule so ayeke tongana a-fibroblaste so ayeke kono mingi na so ahunda ngangu mingi, na a yeke sara si a-actine ti muscle lisse (α-SMA) nga na collagène ti mara I (Col-I) akiri aga mingi [5, 6]. Na ngoi ti kiringo na peko ti fibrose ti foie, a yeke zi a-HSC so asala kusala na lege ti apoptose wala inactivation. A yeke wara na yâ ti aye so ambeni ye so ayeke sara si a-gene so ayeke sara si zo angbâ na fini (tongana alege ti signalisation ti NF-κB nga na PI3K/Akt) [7, 8], nga na achangement so ayeke si na yâ ti a-mitochondrie nga na kusala ti ala [9].
A yeke wara na yâ ti mênë ti zo mbeni ye so ayeke sara si tryptophane aga acide indole-3-propionique (IPA), so ayeke na yâ ti fufu ti zo, na yâ ti akobela so ayeke na yâ ti tere ti zo so na popo ni a yeke wara MASLD [10–13]. IPA ayeke na kamba na tengo fibre ti kobe, a hinga ni ndali ti so lo yeke sara si terê ti zo ason pëpe nga lo yeke sara si zo abâ pasi pëpe, nga lo yeke sara si kobela ti stéatohépatite non-alcoolique (NASH) so ayeke na yâ ti kobe adë na yâ ti tere ti zo nga na yâ ti tere ti lo [11–14]. Ambeni ye so afa so wungo ti IPA so ayeke na yâ ti mênë ti azo so ayeke na kobela ti foie ayeke mingi pëpe na yâ ti étude ti Kuopio Bariatric Surgery (KOBS). Na ndo ni, a fa so yorö ti IPA alingbi ti sara si a-gene so ayeke a-marqueur ti classique ti adhésion ti acellule, ti migration ti acellule nga na ti activation ti a-hématopoïétique so ayeke na yâ ti mbeni model ti cellule stellate ti foie ti zo (LX-2) adë nga so ayeke mbeni ye so alingbi ti bata foie [15]. Me, a ngbâ ti hinga pëpe tongana nyen la IPA ayeke sara si fibrose ti foie akiri na peko na lege so lo yeke sara si apoptose ti HSC nga na bioénergie ti mitocondrie asara kua.
Na ndo so, a fa so IPA ti mênë ayeke na kamba na fango na gigi agene so ayeke na mosoro na yâ apoptose, mitophagie, nga na alege ti dutingo na fini aninga na yâ ti foie ti azo so ayeke na kota tele me so ayeke na kobela ti diabète ti mara 2 pëpe (KOBS). Na ndo ni, a bâ so IPA alingbi ti sara si a zi na yâ ti mênë ti zo nga ti buba yâ ti acellule so ayeke sara si mênë abâ gigi (HSC) na lege ti lege so a iri ni inactivation. Atondo so afa mbeni fini kusala teti IPA, na a sala si a ga mbeni ye so alingbi ti sala kusala na ni ti sava na kobela ti fibrose ti foie.
Mbeni étude so a sara kozo na yâ ti groupe ti KOBS afa so azo so ayeke na kobela ti foie ayeke na IPA so ayeke na yâ ti mênë ti ala mingi pëpe tongana a haka ni na azo so ayeke na kobela ti foie pëpe [15]. Ti zi na gigi aye so alingbi ti sara si zo agi bê ti lo na ndo ti kobela ti diabète ti mara 2, a mû azo 116 so ayeke na kobela ti diabète ti mara 2 pëpe (ngu ti ala ayeke moyenne ± SD: 46,8 ± 9,3 ans; IMC: 42,7 ± 5,0 kg/m2) (Tableau 1) na yâ ti étude so ayeke gue na li ni. Azo kue so amû mbage na ni amû yanga ti sara étude ni na lege ti mbeti nga Komite ti sarango ye na lege ni ti hôpital ti kodoro ti Savo ti Mbongo ayeda na protocole ti étude ni alingbi na tënë ti Helsinki (54/2005, 104/2008 nga na 27/2010).
A mû ambeni biopsie ti foie na ngoi ti opération ti bariatrique na a bâ ni na lege ti histologie na lege ti awasenda-ye so ahinga ye mingi na ndo ti kobela alingbi na aye so a fa ni kozo awe [17, 18]. A yeke wara na yâ ti Tableau supplémentaire S1 a-évaluation so a sara tënë ni kozo awe [19].
A mû a-échantillon ti mênë ti azo so ayeke na jeûne ti bâ ni na lege ti chromatographie-spectrométrie ti masse ti ngu so a leke ni pëpe (LC-MS) ti bâ na lege ti métabolisme (n = 116). A mû a-échantillon ni na lege ti mbeni système ti UHPLC-qTOF-MS (1290 LC, 6540 qTOF-MS, Agilent Technologies, Waldbronn, Karlsruhe, Allemagne) tongana ti so a fa ni kozo awe19. A yeke na lege ni ti tene a hinga alcool isopropyl (IPA) na lege ti ngoi so a bata ni nga na hakango spectre ti MS/MS na a-étalon so ayeke nzoni-kue. A bâ ngangu ti signal ti IPA (ndo ti kota ndo) na yâ ti ambeni gingo nda ti ye kue [20].
A sara kua na Illumina HiSeq 2500 ti sara na séquence ti ARN ti foie kue na a sara kua na asango ni kozo awe tongana ti so a fa ni kozo awe [19, 21, 22]. A sara kua na agene 1957 so a soro ni na yâ ti base de données ti MitoMiner 4.0 [ 23 ]. A yeke na lege ni ti tene a sara kua na mbeni ye so a iri ni Infinium HumanMethylation450 BeadChip (Illumina, San Diego, CA, États-Unis) ti bâ na lege ti oko kode so a fa ni kozo awe [24, 25].
A yeke na lege ti nzobe si Prof. Stefano Romeo amû na ala a-cellule ti stellate ti foie ti azo (LX-2) na a bata ni na yâ ti mbeni ye so a iri ni DMEM/F12 (Biowest, L0093-500, 1% Pen/Strep; Lonza, DE17-602E, 2% FBS11; Gib7260-0). Ti soro wungo ti IPA so ayeke sala kusala, a sala kusala na a-cellule ti LX-2 na akete wungo ti IPA nde nde (10 μM, 100 μM na 1 mM; Sigma, 220027) na yâ ti ngu ti DMEM/F12 teti ngbonga 24. Na ndo ni, ti gi ti hinga ngangu so IPA ayeke na ni ti sara si a-HSC asara kua pëpe, a mû na a-cellule ti LX-2 5 ng/ml ti TGF-β1 (a-système ti R&D, 240-B-002/CF) nga na IPA 1 mM na yâ ti mbeni ye so ayeke na sérum pëpe teti ngbonga 24. Ti a-étude ti véhicule so alingbi na ni, a mû 4 nM HCL so ayeke na 0,1% ti BSA ti sara na TGF-β1 nga na 0,05% ti DMSO ti sara na IPA, na a sara kua na ala use kue legeoko ti sara na combinaison.
A yeke na lege ni ti tene a sara kua na mbeni ye so a iri ni FITC Annexin V so ayeke na 7-AAD (Biolegend, San Diego, CA, États-Unis, Cat# 640922) alingbi na afango lege ti azo so asara ni. Na nduru tënë, a zia LX-2 (1 × 105 cellules/pond) na yâ ti aplaque so ayeke na adû 12 na yâ ti bï oko na pekoni a mû na lo gbâ ti IPA wala IPA nga na TGF-β1. Na lango ti pekoni, a bungbi a-cellule so ayeke flotté nga na a-adhérent, a sara trypsine na ni, a sukula ni na PBS, a kiri a zia ni na yâ ti tampon so ayeke kanga Annexin V, na a zia ni na yâ ti FITC-Annexin V nga na 7-AAD teti penze-ngbonga 15.
A zia na yâ ti a-mitocondrie ti acellule so ayeke na fini mbeni ye so a iri ni MitotrackerTM Red CMXRos (MTR) (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA). Ti sara a-épreuve ti MTR, a zia na yâ ti a-cellule ti LX-2 mbeni densité so ayeke legeoko na IPA nga na TGF-β1. Na peko ti ngbonga 24, a sara si a-cellule so ayeke na fini aga trypsine, a sukula ni na PBS, na pekoni a zia na yâ ti 100 μM MTR na yâ ti mbeni ndo so ayeke na sérum pëpe na 37 °C teti penze-ngbonga 20 tongana ti so a fa ni kozo awe [ 26 ]. Ti gi nda ti mara ti acellule so ayeke na fini, a bâ kota ti acellule ni nga na ngangu ti cytoplasme ni na lege ti aparamètre ti kangbingo yâ ti acellule na devant (FSC) nga na ti kangbingo yâ ti acellule na mbage (SSC).
A mû asango kue (aye so asi 30 000) na lege ti logiciel NovoCyte Quanteon (Agilent) na a gi nda ni na lege ti logiciel NovoExpress® 1.4.1 wala FlowJo V.10.
A mû wungo ti oxygène (OCR) nga na wungo ti acide so ayeke na yâ ti acellule (ECAR) na yâ ti tâ ngoi ni na lege ti mbeni masini ti gingo nda ti aye so ayeke na yâ ti acellule ti ngu-ingo (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) so ayeke na mbeni masini ti Seahorse XF Cell Mito Stress alingbi na afango lege ti azo so asara ni. Na nduru tënë, a zia a-cellule LX-2 2 × 104/pond na ndo ti aplaque ti culture ti a-cellule XF96. Na peko ti so a zia na yâ ti acellule ni bï oko, a mû na ala isopropanol (IPA) nga na TGF-β1 (Kode ti mungo maboko 1). A sara kua na logiciel ti Seahorse XF Wave ti gi nda ti asango, so na yâ ni a yeke wara mbeni ye so a iri ni Générateur ti rapport ti test ti énergie ti acellule ti Seahorse XF. Na lege ti ye so, a leke mbeni Index de santé bioénergétique (BHI) [27].
A sû ARN kue na yâ ti cDNA. Ti hinga ambeni mbilimbili kode, bâ référence [15]. A yeke wara na yâ ti mRNA ti zo P0 (RPLP0) nga na mRNA ti cyclophiline A1 (PPIA) so ayeke na yâ ti ribosome ti zo 60S. A yeke wara na yâ ti ambeti ti e ambeni ye so a iri ni QuantStudio 6 pro Real-Time PCR (Thermo Fisher, Landsmeer, Pays-Bas) so a iri ni TaqManTM Fast Advanced Master Mix Kit (A-Biosystème so a sara kua na ni) wala Kit ti Sensifast SYBR Lo-ROX (Bioline, BIO 94050 so a sara kua na ni ti haka na a-expression ti génétique). paramètre (ΔΔCt) na kode ti ∆∆Ct. A fa anzene nzene tënë na ndo ti akota ye ni na yâ ti aTableau S2 na S3 ti Supplément.
A mû ADN ti nucléaire (ncDNA) nga na ADN ti mitochondrie (mtDNA) na lege ti kit ti mênë na ti nyama ti DNeasy (Qiagen) tongana ti so a fa ni kozo awe [28]. A diko wungo ti mtDNA so ayeke na popo ti ala na lege so a diko wungo ti arégion ti mtDNA oko oko so a leke ni na moyenne géométrique ti arégion ota ti ADN ti nucléaire (mtDNA/ncDNA), tongana ti so a fa ni na yâ ti Méthodes supplémentaires 2. A fa anzene nzene tënë na ndo ti a-aprimeur ti mtDNA na ncDNA na yâ ti Tableau S4 ti supplémentaire.
A zia na yâ ti acellule so ayeke na fini mbeni ye so a iri ni MitotrackerTM Red CMXRos (MTR) (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA) ti bâ na lê ti zo aréseaux ti mitochondrie so ayeke na popo ti acellule nga na ti yâ ti acellule. A zia na yâ ti aplaque ti verre so alingbi na ni (Ibidi GmbH, Martinsried, Allemagne). Na peko ti ngbonga 24, a zia na yâ ti a-cellule ti LX-2 so ayeke na fini 100 μM ti MTR teti penze-ngbonga 20 na 37 °C na a zia na yâ ti a-nucléus ti acellule ni DAPI (1 μg/ml, Sigma-Aldrich) tongana ti so a fa ni kozo awe [29]. A leke aréseaux ti mitochondrie na lege ti mbeni microscope so a iri ni Zeiss Axio Observer (Carl Zeiss Microimaging GmbH, Jena, Allemagne) so a leke ni na mbeni module ti confocal ti Zeiss LSM 800 na 37 °C na yâ ti mbeni pupu so ngu ayeke dä mingi na so a sara kua na mbeni 1NA×3je so ayeke na 5% ti CO2. A wara a-image bale-oko ti série Z teti mara ti échantillon oko oko. Na yâ ti série Z oko oko, a yeke wara ambage 30, so oko oko ayeke na kota ti 9,86 μm. Na yâ ti a-échantillon oko oko, a mû a-image ti akota ndo ti bango ndo bale-oko so ayeke nde nde na lege ti logiciel ZEN 2009 (Carl Zeiss Microimaging GmbH, Jena, Allemagne), na a sara kua na logiciel ImageJ (v1.54d) [30, 31] so a fa ni na yâ ti aparamètre ti Metho3.
A zia na yâ ti acellule ni 2% ti glutaraldehyde na yâ ti mbeni tampon ti phosphate 0,1 M, na pekoni a zia na yâ ni mbeni solution ti tétroxyde d’osmium 1% (Sigma Aldrich, MO, États-Unis), yeke yeke a zi ngu na yâ ni na lege ti acétone (Merck, Darmstadt, Allemagne), na pekoni a zia ni na yâ ti résine époxy. A leke ambeni mbage ti tele so ayeke tâ kete mingi na a zia na yâ ni 1% ti acétate ti uranyl (Merck, Darmstadt, Zamani) nga na 1% ti citrate ti plomb (Merck, Darmstadt, Zamani). A mû a-image ti akota ye na lege ti mbeni microscope ti électronique so ayeke na JEM 2100F EXII (JEOL Ltd, Tokyo, Japon) so ayeke na mbeni tension so ayeke 80 kV.
A yeke na lege ni ti tene a sara kua na mbeni microscope ti lumière so a iri ni Zeiss inversé (Zeiss Axio Vert.A1 na AxioCam MRm, Jena, Allemagne).
A fa asango ti kobela ni tongana moyenne ± écart-type wala médiane (rang interquartile: IQR). A sala kusala na mbeni lege ti gingo nda ti ye oko (a-variable so ayeke gue na li ni) wala test ti χ2 (a-variable so ayeke na yâ ti agroupe) ti haka kangbi so ayeke na popo ti agroupe ota ti mandango ye ni. A sala kusala na taux ti false positif (FDR) ti leke na a-épreuve mingi, na a bâ agene so ayeke na FDR < 0,05 tongana aye so ayeke kota mingi na lege ti statistique. A sara kua na mbeni analyse ti corrélation ti Spearman ti sara si méthylation ti ADN ti CpG ague oko na ngangu ti signal ti IPA, na a fa a-valeur ti p so ayeke na iri (p < 0,05).
A sara kua na mbeni ye ti gingo nda ti agene so ayeke na ndö ti Internet (WebGestalt) ti bâ na a-étude 268 (p ti iri ni), a-étude 119 so abungbi na a-mitochondrie (p ti iri ni < 0,05), nga na a-CpG 4350 so ayeke circulé na popo ti a-étude 309 so ayeke na IPAs3. A sala kusala na gbakuru ti Venny DB (version 2.1.0) so ayeke na liberté ti wara na agene so ayeke na ndo ti mba, na a sala kusala na StringDB (version 11.5) ti bâ na lê ti zo tongana nyen aprotéine ayeke sala kusala maboko na maboko.
Ti tara ti LX-2, a tara a-échantillon ti bâ wala a yeke na lege ni na lege ti tara ti D’Agostino-Pearson. A wara asango na yâ ti a-étude ti biologie ota so a sara ni na lege ti ANOVA so ayeke na lege oko na lege ti test ti Bonferroni post hoc. A bâ so p-value so ayeke na gbe ti 0,05 ayeke kota ye mingi na lege ti statistique. A fa asango ni tongana moyenne ± SD, na a fa wungo ti a-expérience so a sara na yâ ti a-image oko oko. A sara kua na a-analyse nga na agraphe kue na lege ti mbeni logiciel ti statistique so a iri ni GraphPad Prism 8 ndali ti Windows (logiciel GraphPad Inc., version 8.4.3, San Diego, États-Unis).
Kozoni, a gi nda ti kamba so ayeke na popo ti wungo ti IPA so ayeke na yâ ti mênë ti zo na foie, tere ti lo kue nga na a-mitochondrie. Na yâ ti poro ti tere ti zo kue, a yeke wara ngangu gene so abungbi na wungo ti IPA na yâ ti mênë ti zo so ayeke MAPKAPK3 (FDR = 0,0077; protéine kinase 3 so ayeke sara si mitogène asara kua); na yâ ti poro ti tere ti zo so ayeke na yâ ti mitocondrie, a yeke wara ngangu so a iri ni AKT1 (FDR = 0,7621; AKT sérine/thréonine kinase 1) (Dossier 1 nga na Dossier 2).
Na pekoni, a bâ atondo ti dunia kue (n = 268; p < 0,01) nga na atondo so andu mitochondrie (n = 119; p < 0,05), na nda ni a bâ so apoptose ayeke lege ti canon so ayeke kota mingi (p = 0,0089). Ti a-étude ti mitocondrie so ague oko na wungo ti IPA so ayeke na yâ ti mênë, a zia lê na ndo ti apoptose (FDR = 0,00001), mitophagie (FDR = 0,00029), nga na alege ti fango tënë ti TNF (FDR = 0,000006) (Foto 1A, Tableau 2, na a-image ti mungo maboko).
A yeke wara na yâ ti a-étude ni aye so ayeke na yâ ti dunia kue, a-mitochondrie, nga na méthylation ti ADN na yâ ti foie ti zo so ague oko na wungo ti IPA so ayeke na yâ ti mênë ti zo. A yeke wara a-écriture ti dunia kue 268, a-écriture ti dunia kue 119, a-écriture ti ADN so a méthylé ni so a sara carte ni na ndo ti asite ti CpG 3092 so a sara ni na lege ti IPA na yâ ti mênë ti zo (p values ​​< 0,01 ndali ti a-écriture ti dunia kue nga na a-ADN so a méthylé ni, na a-p-value ti mitochon <0). Akota mbeti so abungbi oko ayeke na popo ti ala (AKT1 na YKT6). B A leke carte ti sarango ye ti agene 13 so ayeke na kota wungo ti interaction (0,900) na ambeni gene nde na lege ti agene 56 so ayeke na ndo ti mba (région ti ligne noire) so ayeke na kota kamba na ndo ti wungo ti IPA na yâ ti mênë ti zo na lege ti gbakuru so ayeke na ndo ti Internet StringDB. Vert: A-gene so a sara carte ti ala na yâ ti acellule ti Ontologie génétique (GO): amitocondrie (GO:0005739). AKT1 ayeke protéine so ayeke na kota wungo ti score (0,900) teti salango kusala na ambeni protéine so aluti na ndo asango (so aluti na ndo gingo nda ti atënë, a-expérience, a-base ti asango, nga na salango kusala maboko na maboko). A-node ti réseau ayeke fä ti aprotéine, na ayanga ti kodoro ni ayeke fä ti abungbi so ayeke na popo ti aprotéine.
Teti so a-métabolite ti microbiota ti yâ ti zo alingbi ti leke yâ ti épigénétique na lege ti méthylation ti ADN [32], a gi ti hinga wala wungo ti IPA na yâ ti mênë ti zo ayeke na kamba na méthylation ti ADN ti foie. A bâ so akota ndo use ti méthylation so ague oko na wungo ti IPA na yâ ti mênë ayeke nduru na ndo so proline-sérine ayeke dä mingi 3 (C19orf55) nga na membre ti sewa ti protéine ti chaleur B (kete) 6 (HSPB6) (Dossier ti mungo maboko 3). ADN ti méthylation ti 4350 CpG (p < 0,01) a yeke na lege ni na lege ti IPA na yâ ti mênë ti zo na a yeke wara na yâ ti alege ti lekengo ye ti ngbâ na fini aninga (p = 0,006) (Foto 1A, Tableau 2, na Figure 1C ti mungo maboko).
Ti hinga ye na ndo ti akode ti biologie so ayeke na gunda ti songo so ayeke na popo ti wungo ti IPA na yâ ti mênë, a-transcript ti dunia kue, a-transcript so ayeke na yâ ti mitochondrie nga na méthylation ti ADN na yâ ti foie ti zo, a sara mbeni gingo nda ti ye na ndo ti agene so a fa ni na yâ ti akozo gingo nda ti lege so a sara (Foto 1A). Azo so abâ lege ti sarango si agene 56 so ayeke na ndo ti mba (na yâ ti ligne ti noir so ayeke na yâ ti tableau 1A) afa so lege ti apoptose (p = 0,00029) afa na gigi agene use so ayeke oko na yâ ti a-analyse ota so: AKT1 na YKT6 (YKT6 v-SNARE homolog na yâ ti tableau Ven2), tongana ti so a fa. 1A). Ye ti dongo bê ni ayeke so, a bâ so AKT1 (cg19831386) na YKT6 (cg24161647) ayeke na nzoni songo na wungo ti IPA so ayeke na yâ ti mênë ti zo (Fichier 3 ti mungo maboko). Ti hinga aye so alingbi ti sara si aprotéine asara kua maboko na maboko na popo ti aproduit ti agene, a soro agene 13 so ayeke na kota score ti région commune (0,900) na popo ti agene 56 so ayeke na ndo ti mba tongana ye ti lï na ni na a leke mbeni carte ti sarango kua maboko na maboko. Na lege ti nivo ti confiance (confiance marginale), gene ti AKT1 so ayeke na kota wungo ti azo (0,900) ayeke na li ni (Foto 1B).
Na lege ti gingo nda ti ye na ndo alege ti salango ye, a bâ so apoptose ayeke kota lege ti salango ye, tongaso a gi ti hinga wala yorö ti IPA ayeke sala ngangu na ndo apoptose ti a-HSC na yâ ti a-in vitro. A fa kozoni awe so akete dose nde nde ti IPA (10 μM, 100 μM, na 1 mM) ayeke na sioni ye pëpe na yâ ti acellule ti LX-2 [15]. Ye so afa so tongana a mû IPA na 10 μM nga na 100 μM, a sara si wungo ti acellule so ayeke na fini nga na so ayeke kui aga mingi. Me, tongana a haka ni na groupe ti azo so abâ lege ti ala, ngangu ti fini ti acellule ni ayeke kiri na peko na ngoi so a mû na ala IPA 1 mM, na ngoi so wungo ti acellule so ayeke kui angbâ gi tongaso (Foto 2A, B). Na pekoni, ti wara nzoni wungo ti aye so alingbi ti sara si apoptose asi na yâ ti acellule ti LX-2, a tara IPA 10 μM, 100 μM nga na 1 mM teti ngbonga 24 (Foto 2A-E nga na Figure 3A-B ti mungo maboko). Ye ti dongo bê ni ayeke so, IPA 10 μM na 100 μM asara si wungo ti apoptose (%) adë, me IPA 1 mM asara si apoptose ti peko nga na apoptose (%) akiri na peko tongana a haka ni na azo so abâ lege ti ala na a soro ni ti sara ambeni ye nde (Afoto 2A–D).
IPA ayeke sara si a-apoptose ti acellule ti LX-2 akui. A sara kua na Annexin V nga na 7-AAD ti hinga wungo ti apoptose nga na ti morphologie ti acellule na lege ti cytométrie ti flux. A zia na yâ ti a-cellule ti BA 10 μM, 100 μM nga na 1 mM ti IPA teti ngbonga 24 wala na F–H TGF-β1 (5 ng/ml) nga na 1 mM ti IPA na yâ ti mbeni ndo so ayeke na sérum pëpe teti ngbonga 24. A: a yeke a -cellule so ayeke na fini (Annexe V -/ 7AAD-); B: a yeke wara na yâ ti a-annexe V -/ 7AAD+); C, F: kozoni (Annexe V +/ 7AAD-); D, G: na nda ni (Annexe V+/7AAD.+); E, H: wungo ti a-apoptose kue so ayeke na yâ ti akozo cellule nga na a-apoptose so ayeke na yâ ti apoptose (%). A fa asango ni tongana moyenne ± SD, n = 3 a-expérience so ayeke nde. A sara kua na ANOVA so ayeke na lege oko nga na test ti Bonferroni so a iri ni post hoc. *p < 0,05; p < 0,0001
Tongana ti so a fa kozo awe, 5 ng/ml ti TGF-β1 alingbi ti sara si HSC asara kua na lege so lo yeke sara si a-gene ti marqueur ti classique ni aga mingi [15]. A yeke wara na yâ ti a-cellule ti LX-2 5 ng/ml ti TGF-β1 nga na 1 mM ti IPA so a bungbi ni (Fig. 2E–H). TGF-β1 asala si wungo ti apoptose achangé pëpe, me, IPA asala si wungo ti apoptose ti nda ni nga na apoptose (%) ague na li ni tongana a haka ni na TGF-β1 (Fig. 2E–H). Azo so abâ so IPA 1 mM alingbi ti sara si apoptose na yâ ti acellule ti LX-2 abâ gigi sân ti tene TGF-β1 asara si a sara kua na ni.
A kiri a gi nda ti ngangu so IPA ayeke sala na ndo ti pupu ti mitochondrie so ayeke na yâ ti acellule ti LX-2. Azo so abâ ni afa so 1 mM IPA asara si a-paramètre ti wungo ti oxygène (OCR) adë: pupu so ayeke ti mitocondrie pëpe, pupu so ayeke na yâ ti base nga na pupu so ayeke kota mingi, futingo ti proton nga na sarango ATP tongana a haka ni na groupe ti azo so abâ lege ti ala (Foto 3A, B), na ngoi so index ti santé bioénergique (BHI) achangé pëpe.
IPA ayeke sara si pupu so ayeke na yâ ti acellule ti LX-2 adë. A yeke fa courbe ti pupu ti mitochondrie (OCR) tongana aparamètre ti pupu ti mitochondrie (wungo so ayeke ti mitochondrie pëpe, pupu ti basal, pupu so ayeke kota mingi, futingo ti proton, lekengo ATP, SRC na BHI). A zia na yâ ti acellule A na B 10 μM, 100 μM nga na 1 mM IPA teti ngbonga 24. A zia na yâ ti acellule C na D TGF-β1 (5 ng/ml) nga na IPA 1 mM na yâ ti mbeni ye so ayeke na sérum pëpe teti ngbonga 24. A mû amesure kue ti tene a lingbi na ADN na lege ti kit ti CyQuant. BHI: index ti santé ti bioénergie; SRC: ngangu ti batango pupu; OCR: wungo ti oxygène so zo ayeke mû. A fa asango ni tongana moyenne ± écart-type (DS), n = 5 a-expérience so ayeke nde. A sara kua na ANOVA so ayeke na lege oko nga na test ti Bonferroni so a iri ni post hoc. *p < 0,05; **p < 0,01; na ***p < 0,001
Ti wara mbeni hingango ye so ayeke kota mingi na ndo ti ngangu so IPA ayeke sara na ndo ti bioénergie ti a-cellule ti LX-2 so ayeke sara kua na TGF-β1, a sara kua na OCR ti sara si a-oxydant ti mitochondrie abâ gigi (Fig. 3C,D). Azo so abâ ni afa so yorö ti TGF-β1 alingbi ti sara si wungo ti azo so ayeke na yâ ti pupu, ti réserve ti pupu (SRC) nga na ti BHI adë tongana a haka ni na azo so ayeke na yâ ti groupe ti azo so abâ lege ti ala (Fig. 3C,D). Na ndo ni, a yeke wara na yâ ti akode ti kaïngo kobela so a sara si a yeke ngangu pëpe ti tene a zia pupu na yâ ti terê ti zo, a yeke sara si a-proton nga na ATP abâ gigi, me SRC na BHI ayeke mingi ahon azo so a sara kua na TGF-β1 (Fig. 3C,D).
A sara nga “Test ti phénotype ti énergie cellulaire” so logiciel ti Seahorse amû (Fig. 4A–D ti supplément). Tongana ti so a fa na yâ ti Fig. 3B ti Supplément, a sara si ngangu ti OCR nga na ti ECAR adë na peko ti so a mû na ala yorö ti TGF-β1, me a bâ so kangbi ayeke pëpe na popo ti azo so amû yorö ti bungbingo ye nga na ti IPA tongana a haka ni na groupe ti azo so amû yorö ti bango ndo na ndo ti ala. Na ndo ni, a yeke wara na yâ ti OCR ni akota ye nga na akota ye so ayeke na yâ ti stress na peko ti so a bungbi ni nga na yorö ti IPA tongana a haka ni na groupe ti azo so abâ lege ti ala (Fig. 4C ti supplément). Ye ti dongo bê ni ayeke so, a bâ mara ti ye tongaso na lege ti akode ti kaïngo kobela so abungbi, na ndo so a bâ pëpe mbeni gbiango ye na yâ ti basal nga na stress ti ECAR tongana a haka ni na akode ti kaïngo kobela ti TGF-β1 (Fig. 4C ti mungo maboko). Na yâ ti HSC, a yeke sara si phosphorylation oxidative ti mitochondrie nga na ngangu ti akode ti kaïngo kobela so abungbi ti kiri na SCR na BHI na peko ti so a mû na ala yorö ti TGF-β1 achangé pëpe ngangu so a yeke sara na yâ ti tere ti zo (OCR na ECAR). Tongana a mû ni kue, aye so asi afa so IPA alingbi ti sara si bioénergétique na yâ ti aHSC adë, so afa so IPA alingbi ti sara si mbeni kete ngangu so ayeke na yâ ti HSC ni achangé ti tene a sara kua na ni pëpe (Foto 4D ti mungo maboko).
A gi nda ti ngangu so IPA ayeke sala na ndo ti ngangu ti mitochondrie na lege ti salango kusala na a-dimension ota ti wungo ti mitochondrie nga na abungbi ti aréseaux nga na ti salango kusala na MTR (Foto 4 na Figure 5 ti mungo maboko). A fa so, tongana a haka ni na groupe ti azo so abâ lege ti ala, yorö ti TGF-β1 asara si moyen ti surface ti terê ti zo, wungo ti amaboko ni, yongo ti amaboko ni kue nga na wungo ti amaboko ni so abungbi aga kete (image 4A na B) nga achangé wungo ti a-mitocondrie so alondo na sphérique ti ga na popo-hoto (image 4C). Gi yorö ti IPA la asara si wungo ti amitochondrie so ayeke na yâ ti mênë ti zo adë nga so achangé wungo ti amitochondrie so alondo na sphère ti si na mbeni morphologie so ayeke na popo-hoto tongana a haka ni na groupe ti azo so abâ lege ti ala (Foto 4A). Na tapande, sphéricité, yongo ti branche moyenne, nga na kusala ti mitochondrie so a bâ ni na lege ti MTR so abâ lege ti ngangu ti membrane ti mitochondrie (Foto 4A na E) angbâ gi tongaso na aparamètre so ayeke nde pëpe na popo ti agroupe. Tongana a bungbi aye so kue, a bâ so yorö ti TGF-β1 na ti IPA ayeke gbian forme nga na kota ti mitochondrie nga na ngangu ti réseau so ayeke na yâ ti acellule ti LX-2 so ayeke na fini.
IPA ayeke changé ngangu so a-mitochondrie ayeke sara nga na wungo ti ADN ti a-mitochondrie so ayeke na yâ ti acellule ti LX-2. A. A-image ti confocal so afa na gigi a-cellule ti LX-2 so ayeke na fini so a zia na yâ ti TGF-β1 (5 ng/ml) nga na IPA 1 mM teti ngbonga 24 na yâ ti mbeni ndo so ayeke na sérum pëpe so afa aréseaux ti mitochondrie so a sara ni na MitotrackerTM Red CMXRos nga na a-nucléus so a sara ni na bleu na DAPI. Asango ni kue ayeke na a-image kamême 15 na yâ ti groupe oko oko. A wara a-image 10 ti Z-stack ndali ti mara ti échantillon oko oko. Na yâ ti molongo ti a-axe Z oko oko, a yeke wara akete kete ye 30, so oko oko ayeke na kota ti 9,86 μm. Barre ti échelle ni: 10 μm. B. Aye so ayeke fa ye (gi amitocondrie) so a hinga ni na lege ti salango kusala na threshold so alingbi na image ni. A sara mbeni gingo nda ti ye na ndo ti wungo ti acellule nga na hakango abungbi ti aréseaux morphologique ti mitochondrie ndali ti acellule kue so ayeke na yâ ti groupe oko oko. C. Fani mingi a yeke sara kua na a-mitochondrie. Akete wungo so ayeke nduru na 0 afa so a yeke wara aforme so ayeke sphère, na akete wungo so ayeke nduru na 1 afa so a yeke wara aforme so ayeke tongana filament. D A fa wungo ti ADN ti mitochondrie (mtDNA) tongana ti so a fa na yâ ti mbeti so a iri ni Matériaux et méthodes. E MitotrackerTM Red CMXRos a sala kusala na cytométrie ti flux (aye 30 000) tongana ti so a fa na yâ ti Aye ti kusala na alege ti salango ye. A fa asango ni tongana moyenne ± SD, n = 3 a-expérience so ayeke nde. A sara kua na ANOVA so ayeke na lege oko nga na test ti Bonferroni so a iri ni post hoc. *p < 0,05; **p < 0,01; ***p < 0,001; p < 0,0001
Na pekoni, a bâ wungo ti mtDNA so ayeke na yâ ti acellule ti LX-2 tongana mbeni ye so afa wungo ti amitochondrie. Tongana a haka ni na groupe ti azo so abâ lege ti ala, a yeke wara mtDNA so ayeke na yâ ti groupe ti azo so a mû na ala TGF-β1 (Foto 4D). Tongana a haka ni na groupe ti azo so a mû na ala TGF-β1, a yeke wara mtDNA so ayeke na yâ ti groupe ti azo so a mû na ala yorö so a bungbi ni (Foto 4D), so afa so IPA alingbi ti sara si mtDNA ti ala adë nga peut-être wungo ti amitochondrie nga na pupu ti mitochondrie adë (Foto 3C). Na ndo ni, a yeke mo bâ mo tene IPA ayeke sara si mtDNA so ayeke na yâ ti akode ti kaïngo kobela so abungbi aga kete me a yeke sara pëpe si a-mitochondrie so ayeke na yâ ti a-mitochondrie so ayeke na yâ ti MTR asara kua (A-image 4A–C).
A gi nda ti kamba so ayeke na popo ti IPA na a-mRNA ti agene so ayeke sara si zo awara fibrose, apoptose, fini ti lo nga na ngangu so lo yeke sara na yâ ti acellule ti LX-2 (Foto 5A–D). Tongana a haka ni na groupe ti azo so a mû na ala yorö ti TGF-β1, ala fa so ala yeke na gbâ ti agene tongana chaîne α2 ti collagène ti mara I (COL1A2), actine ti muscle lisse α (αSMA), métalloprotéinase ti matrice 2 (MMP2), gene so ayeke kanga lege na métalloprotéinase ti tissu (Dy-RPD), na dyna-RP11. a yeke wara fibrose na a yeke sara kua. Na ndo ni, tongana a haka ni na groupe ti azo so abâ lege ti ala, yorö ti TGF-β1 asara si mRNA ti récepteur ti nucléaire ti pregnane X (PXR), ti caspase 8 (CASP8), ti MAPKAPK3, ti kangango lege na acellule B α, ti sara si peptide ti lumière ti génétique ti facteur nucléaire κ ti kinase (NFκhibiB1A) adë. β (IKBKB) (Foto 5A-D). Tongana a haka ni na yorö ti TGF-β1, yorö so a bungbi ni na TGF-β1 na IPA asara si COL1A2 na MMP2 abâ gigi mingi pëpe, me a sara si mRNA ti PXR, TIMP1, lymphome ti acellule B-2 (BCL-2), CASP8, NFκB1A, NFκβKB1-IK akiri aga mingi. IPA asara si a yeke wara gbâ ti MMP2, protéine X so abungbi na Bcl-2 (BAX), AKT1, protéine 1 so ayeke sara si lê ti zo abuba (OPA1), nga na protéine 2 (MFN2) so ayeke sara si lê ti zo abuba, me a yeke sara si CASP8, NFκB1A, NFκB1B so ayeke na yâ ti groupe ti azo so abâ lege ti ala abâ gigi. Me, a wara pëpe mbeni kangbi na popo ti sarango ye ti caspase-3 (CASP3), ti facteur so ayeke sara si a-apoptose akui (APAF1), ti protéine so ayeke sara si a-mitochondrie abungbi (MFN1) nga na ti so ayeke sara si a-mitochondrie abungbi (FIS1). Na bungbingo aye so kue, a fa so yorö ti IPA ayeke gbian lege so agene so ayeke na yâ ti fibrose, apoptose, fini ti zo nga na ngangu ti mitochondrie ayeke sara kua. Asango ti e afa so yorö ti IPA ayeke sara si fibrose so ayeke na yâ ti acellule ti LX-2 adë; na oko ngoi ni, a yeke pusu zo ti ngbâ na fini na lege so lo yeke gbian fä ti tele ti lo ti gue na mbage ti inactivation.
IPA ayeke sara si a-cellule ti LX-2 abâ gigi na yâ ti a-cellule ti fibroblaste, ti apoptose, ti fini nga na ti mitochondrie. A-histogramme afa so mRNA ni ayeke na lege ni na lege ti endogène (RPLP0 wala PPIA) na peko ti so a zia na yâ ti a-cellule ti LX-2 TGF-β1 nga na IPA na yâ ti mbeni ndo so ayeke na sérum pëpe teti ngbonga 24. A afa a-fibroblaste, B afa a-apoptose, C afa a-cellule so angbâ na fini, na D afa a-gene so ayeke sara si a-mitocondrie ayeke sara kua nzoni. A fa asango ni tongana moyenne ± écart-type (DS), n = 3 a-expérience so ayeke nde. A sara kua na ANOVA so ayeke na lege oko nga na test ti Bonferroni so a iri ni post hoc. *p < 0,05; **p < 0,01; ***p < 0,001; p < 0,0001
Na pekoni, a bâ achangement so ayeke si na yâ ti kota ti acellule (FSC-H) nga na akota ye so ayeke na yâ ti cytoplasme (SSC-H) na lege ti cytométrie ti flux (Foto 6A,B), nga a bâ achangement so ayeke si na yâ ti forme ti acellule na peko ti so a sara kua na IPA na lege ti microscopie électronique ti transmission (TEM) nga na microscopie ti kangbingo popo ti aphase (Foto 6 ti mungo maboko). Tongana ti so a fa ni kozo awe, a-cellule ti groupe so a mû na ala TGF-β1 akono ahon ti so a mû na ala (Foto 6A,B), so afa so akota cellule ti endoplasmique (ER*) nga na a-phagolysosomes (P) ayeke kono, so afa so a-hématopoïétique (HSC) ayeke sara kua (Foto 6A ti mungo maboko). Me, tongana a haka ni na groupe ti azo so a mû na ala yorö ti TGF-β1, kota ti acellule, ngangu ti cytoplasme (Fig. 6A,B), nga na wungo ti ER* so ayeke na yâ ti groupe ti azo so amû yorö ti TGF-β1 na IPA (Fig. 6A ti mungo maboko). Na ndo ni, salango kusala na IPA asala si kota ti acellule, ngangu ti cytoplasme (Fig. 6A,B), P nga na ER* so ayeke na yâ ni (Fig. 6A ti mungo maboko) adë tongana a haka ni na groupe ti azo so abâ lege ti ala. Na ndo ni, wungo ti a-apoptose so ayeke na yâ ti a-apoptose ni ague na li ni na peko ti so a mû na ala yorö ti IPA ngbonga 24 tongana a haka ni na groupe ti azo so a mû na ala yorö ni (flèche blanche, Fig. 6B ti supplément). Na bungbingo, aye so asi afa so 1 mM IPA alingbi ti pusu apoptose ti HSC na ti kiri na peko ti achangement so ayeke si na yâ ti aparamètre ti morphologie ti acellule so TGF-β1 asara, tongaso si a leke kota ti acellule ni nga na ngangu ti ala, so alingbi ti sara si HSC asara kua pëpe.
IPA ayeke changé kota ti acellule nga na ngangu ti cytoplasme so ayeke na yâ ti acellule ti LX-2. A yeke wara na yâ ti a-image ni cytométrie ti flux. Azo so asara analyse ni asara kua na mbeni kode ti gating so ayeke mbilimbili ndali ti acellule ti LX-2: SSC-A/FSC-A ti fa wungo ti acellule ni, FSC-H/FSC-A ti hinga na a-double, nga na SSC-H/FSC-H ti bâ kota ti acellule ni nga na ngangu ti ala. A zia na yâ ti acellule ni TGF-β1 (5 ng/ml) nga na IPA 1 mM na yâ ti mbeni ye so ayeke na sérum pëpe teti ngbonga 24. A kangbi yâ ti a-cellule ti LX-2 na yâ ti a-cellule so ayeke na gbe ni (SSC-H-/FSC-H-), a-cellule so ayeke na nduzu (SSC-H+/FSC-H-), a-cellule so ayeke na gbe ni (SSC-H-/FSC-H+), nga na a-cellule so ayeke na nduzu (SSC-H+/FSC-H+) ti bâ wala a-cellule ni ayeke kota mingi. B. A gi nda ti mara ti acellule na lege ti cytométrie ti flux na salango kusala na FSC-H (diffusion ti devant, kota ti acellule) nga na SSC-H (diffusion ti mbage, complexité ti cytoplasme) (aye 30 000 so asi). A fa asango ni tongana moyenne ± SD, n = 3 a-expérience so ayeke nde. A sara kua na ANOVA so ayeke na lege oko nga na test ti Bonferroni so a iri ni post hoc. *p < 0,05; **p < 0,01; ***p < 0,001 na ****p < 0,0001
A-métabolite ti yâ ti zo tongana IPA aga mbeni kota tënë ti gingo nda ti ye, na ye so afa so a lingbi ti wara afini ye na yâ ti microbiota ti yâ ti zo. Tongaso, a yeke ye ti dongo bê so IPA, mbeni métabolite so a tingbi ni na fibrose ti foie na yâ ti azo [15], afa so lo yeke mbeni ye so alingbi ti sara si fibrose ti zo aga nzoni pëpe na yâ ti anyama [13, 14]. Na ndo so, a fa teti kozoni mbeni kamba so ayeke na popo ti IPA ti mênë na transcriptomique ti foie ti dunia kue nga na méthylation ti ADN na yâ ti azo so ayeke na kobela ti diabète ti mara 2 (T2D), so afa apoptose, mitophagie nga na dutingo na fini aninga, nga na mbeni gene so alingbi ti duti candidat AKT1 so ayeke leke hôméostase ti foie. Mbeni ye so ayeke fini ye na yâ ti étude ti e ayeke so e fa so yorö ti IPA ayeke sara kua maboko na maboko na apoptose, morphologie ti acellule, bioénergie ti mitochondrie nga na dynamique na yâ ti acellule ti LX-2, so afa so mbeni spectre ti ngangu so ayeke na gbe ni ayeke changé fä ti HSC ti gue na mbage ti inactivation, na a sara si IPA aga mbeni candidat so alingbi ti sara si li ti zo aga nzoni.
A bâ so apoptose, mitophagie nga na yongoro fini ayeke akota lege ti canon so ayeke na mosoro na yâ ti agene ti foie so abungbi na IPA ti mênë so ayeke tambela. Ti buba yâ ti système ti bango lege ti nzoni ti mitochondrie (MQC) alingbi ti sara si a-mitochondrie asara kua nzoni pëpe, mitophagie nga na apoptose, na tongaso a yeke sara si MASLD asi [33, 34]. Tongaso, a lingbi ti tene so IPA alingbi ti mû mbage na yâ batango ngangu ti acellule nga na dutingo beoko ti a-mitochondrie na lege ti apoptose, mitophagie nga na dutingo na fini aninga na yâ ti foie. Asango ti e afa so agene use ayeke na yâ ti a-essai ota so: YKT6 na AKT1. A yeke nzoni ti hinga so YKT6 ayeke mbeni protéine ti SNARE so ayeke mû mbage na yâ ti kusala ti bungbingo ti membrane ti acellule. Lo yeke sara kua na yâ ti autophagie nga na mitophagie na lege so lo yeke sara mbeni ye ti tongo nda ni na STX17 nga na SNAP29 na ndö ti autophagosome, tongaso lo yeke sara si a-autophagosome na a-lysosome abungbi oko [35]. Na ndo ni, ti tene YKT6 asara kua nzoni pëpe, a yeke sara si mitophagie ti zo ni aga nzoni pëpe [36], na ngoi so upregulation ti YKT6 ayeke gue na li ni ti wara kobela ti cancer ti hépatocellulaire (HCC), so afa so a yeke sara si a-cellule ni angbâ na fini mingi [37]. Na mbage, AKT1 ayeke kota gene so ayeke sara kua maboko na maboko na lo yeke sara kota kua na yâ ti akobela ti foie, so na popo ni a yeke wara lege ti fango tënë ti PI3K/AKT, cycle ti acellule, guengo na li ni ti acellule, guengo na li ni ti acellule, adhésion focale, kusala ti mitochondrie, nga na sigingo ti collagène [38–40]. A yeke na lege ni ti tene e sara kua na a-hématopoïétique (HSC), so ayeke a-cellule so ayeke sara si a-extracellule (ECM) abâ gigi, na dysrégulation ti lo alingbi ti sara si kobela ti foie abâ gigi nga ti gue na li ni. Na ndo ni, AKT ayeke mbeni oko ti akota ye so ayeke sara si acellule angbâ na fini so ayeke kanga lege na apoptose ti acellule so abâ lege ti p53, na AKT alingbi ti sara si acellule ti foie akui [41, 42]. Azo so awara ye so afa so IPA alingbi ti mû mbage na yâ ti apoptose so ayeke na yâ ti a-mitochondrie ti foie na lege so lo yeke sara ngangu na ndo ti desizion ti a-hépatocyte na popo ti lïngo na yâ ti apoptose wala ti ngbâ na fini. A lingbi ti leke aye so na lege ti agene so ayeke na yâ ti AKT nga na/wala YKT6, so ayeke kota ye mingi ndali ti hôméostase ti foie.
Azo so abâ ni afa so 1 mM IPA asara si apoptose asara si a-mitocondrie so ayeke na yâ ti a-cellule ti LX-2 adë sân ti tene a mû yorö ti TGF-β1. A yeke nzoni ti hinga so apoptose ayeke mbeni kota lege ti lekengo fibrose na ti salango kusala na acellule ti mênë (HSC), na a yeke nga mbeni kota ye so ayeke si na yâ ti kiringo tënë ti physiologique so alingbi ti kiri na peko ti fibrose ti foie [4, 43]. Na ndo ni, kiringo na BHI na yâ ti acellule ti LX-2 na peko ti so a bungbi akode ti kaïngo kobela amû afini hingango ye na ndo ti kusala so IPA alingbi ti sara na yâ ti lekengo bioénergie ti mitochondrie. Na ngoi so zo ayeke wu tere ti lo nga lo yeke sara kua pëpe, a-hématopoïète ayeke sara kua mingi na phosphorylation oxidative ti mitocondrie ti sara na ATP nga ti sara kua mingi pëpe. Na mbage, HSC ayeke sara si a-mitochondrie ayeke hu pupu nzoni nga ayeke sara biosynthèse ti tene a lingbi na ngangu so a hunda ti lï na yâ ti glycolyse [44]. So IPA asara pëpe ngangu na ndo ti ngangu ti métabolisme nga na ECAR afa so lege ti glycolyse ayeke kota ye mingi pëpe. Legeoko nga, mbeni gingo nda ti ye nde afa so IPA 1 mM alingbi ti gbian kusala ti chaîne ti pupu ti mitocondrie na yâ ti a-cardiomyocyte, a-hépatocyte ti zo (Huh7) nga na a-endothélium ti veine umbilicale ti zo (HUVEC); Me, a wara pëpe mbeni ye so IPA asara na ndo ti glycolyse na yâ ti a-cardiomyocyte, so afa so IPA alingbi ti sara ngangu na ndo ti bioénergie ti ambeni mara ti acellule [45]. Tongaso, a yeke na lege ni ti tene so 1 mM IPA alingbi ti sara kua tongana mbeni ye so ayeke sara si a yeke ngangu pëpe ti sara kua na ni, ndali ti so a lingbi ti sara si a-expression ti agene fibrogène, a-morphologie ti acellule nga na a-bioénergie ti mitochondrie adë mingi sân ti tene a changé wungo ti mtDNA [46]. Azo so ayeke sara kua na a-mitochondrie alingbi ti kanga lege na fibrose so alondo na culture nga na sarango si HSC asara kua [47] nga ti sara si a-ATP so ayeke na yâ ti a-mitocondrie abâ gigi pëpe so ambeni protéine tongana a-protéine so ayeke zi yâ ti a-adénine (UCP) wala a-adénine nucléotide translocase (ANT) ayeke sara kua nzoni pëpe. Na lege ti mara ti acellule ni, ye so alingbi ti bata acellule ni ti tene a fâ ala pëpe nga/wala ti sara si a cellule ni akui pëpe [46]. Ye oko, a hunda ti tene a kiri a gi nda ti ye mingi ti fa kusala ti IPA tongana mbeni ye so ayeke zi yâ ti a-mitochondrie na yâ ti sarango si a-hématopoïèse asara kua pëpe.
Na pekoni, a gi ti hinga wala achangement so ayeke si na yâ ti pupu so ayeke na yâ ti a-mitochondrie ayeke na yâ ti a-mitochondrie so ayeke na yâ ti acellule ti LX-2 so ayeke na fini. A yeke ye ti dongo bê so, yorö ti TGF-β1 achangé wungo ti amitochondrie so alondo na sphère ti si na popo-hoto, na a sara si a-branche ti mitochondrie ni akiri na peko nga a sara si DRP1, so ayeke mbeni kota ye so ayeke sara si a-mitochondrie ni akangbi, akiri aga mingi [48]. Na ndo ni, kangbingo yâ ti amitocondrie ayeke sara si réseau ni kue aga ngangu, na gbiango ye so alondo na fusion ti gue na fission ayeke kota ye mingi ndali ti so acellule ti mênë (HSC) asara kua, me kangango lege na kangbingo yâ ti amitochondrie ayeke sara si HSC akui [49]. Tongaso, ye so e wara afa so yorö ti TGF-β1 alingbi ti sara si réseau ti mitochondrie ni aga kete na lege so a yeke sara si a-branche ni adë, so ayeke si mingi na yâ ti fission ti mitochondrie so abungbi na a-activé hématopoïétique (HSC). Na ndo ni, asango so e wara afa so IPA alingbi ti changé wungo ti amitocondrie so alondo na forme ti sphère ti ga forme ti popo-hoto, na tongaso a sara si a yeke sara si OPA1 na MFN2 abâ gigi pëpe. Azo so asara étude afa so tongana a sara si OPA1 adë, a lingbi ti sara si ngangu ti membrane ti mitochondrie adë nga ti sara si a-apoptose ti acellule abâ gigi [50]. MFN2 ayeke mbeni ye so a hinga ni tongana mbeni ye so ayeke sara si a-mitochondrie abungbi oko nga na apoptose [51]. Azo so awara ye so afa so induction ti acellule ti LX-2 na lege ti TGF-β1 na/wala IPA ayeke mo bâ mo tene a yeke changé forme nga na kota ti a-mitocondrie, nga na dutingo ti activation nga na complexité ti réseau.
Azo so abâ ni afa so bungbingo ti akode ti kaïngo kobela ti TGFβ-1 na IPA alingbi ti sara si mtDNA nga na aparamètre ti morphologie ti acellule adë na lege so a yeke leke yâ ti mRNA ti fibrose, apoptose nga na agene so ayeke sara si zo angbâ na fini na yâ ti acellule so ayeke kpe apoptose. Biani, IPA asara si mRNA ti AKT1 nga na akota gene ti fibrose tongana COL1A2 na MMP2 adë, me a sara si CASP8, so ayeke sara si apoptose, akiri aga mingi. Azo so abâ ni afa so na peko ti so a mû na ala yorö ti IPA, BAX akiri na peko nga mRNA ti akete kete ye ti sewa ti TIMP1, BCL-2 na NF-κB, ague na li ni, ye so afa so IPA alingbi ti pusu a-signal ti fini na yâ ti a-hématopoïétique (HSC) so ayeke kpe apoptose. A-molécule so alingbi ti sara kua tongana a-signal so ayeke mû maboko na zo ti ngbâ na fini na yâ ti a-activé hématopoïétique, so alingbi ti sara si a-anti-apoptose (tongana Bcl-2) abâ gigi mingi, BAX so ayeke sara si a-apoptose abâ gigi mingi pëpe, nga na mbeni ngangu sarango ye na popo ti TIMP na NF-κB [5, 7]. IPA ayeke sala kusala na lege ti PXR, na a bâ so salango kusala na TGF-β1 na IPA asala si wungo ti mRNA ti PXR ague na li ni, so afa so a kanga lege na kusala ti HSC. Azo so ahinga ti sara kua na PXR ayeke kanga lege na HSC ti sara kua na yâ ti tere ti zo nga na yâ ti tere ti zo [52, 53]. Azo so abâ ni afa so IPA alingbi ti mû mbage na yâ ti zingo a-HSC so a sara kua na ni na lege so lo yeke sara si apoptose, fibrose nga na métabolisme ti mitochondrie adë, nga lo yeke sara si a-signal ti fini aga nzoni, so ayeke ambeni ye so ayeke sara si a-HSC so a sara kua na ni aga mbeni ye so ayeke sara kua pëpe. Mbeni ye nde so alingbi ti fa nda ti lege so IPA alingbi ti sala kusala na ni na yâ ti apoptose ayeke so lo yeke zi a-mitochondrie so ayeke sala kusala nzoni pëpe kozoni kue na lege ti mitophagie (lege ti yâ ti tele) nga na lege ti fango tënë ti TNF so ayeke na gigi (Tableau 1), so ayeke na kamba mbilimbili na lege ti fango tënë ti NF-κB so ayeke mû lege na zo ti ngbâ na fini (lege ti fango tënë ti NF-κB Figure7). Ye ti dongo bê ni ayeke so, a-gene so akono mingi so andu IPA alingbi ti sara si a-apoptose nga na a-pro-survie abâ gigi na yâ ti lege ti apoptose [54], so afa so IPA alingbi ti sara si lege ti apoptose wala fini ti zo abâ gigi na lege so lo yeke sara kua na a-gene so. Ye oko, tongana nyen la IPA ayeke sara si apoptose wala fini ti zo angbâ na fini na ngoi so HSC ayeke sara kua nga na alege so lo yeke sara kua na ni angbâ polele pëpe.
IPA ayeke mbeni ye so a leke ni na lege ti tryptophane so ayeke na yâ ti kobe na lege ti microbiota ti yâ ti zo. A-étude afa so lo yeke na a-anti-inflammatoire, a-antioxydant, nga na a-épigénétique so ayeke sara si terê ti zo ason pëpe.[55] A-étude afa so IPA alingbi ti changé kusala ti barrière ti yâ ti zo nga ti sara si stress oxidatif adë, so alingbi ti sara si a yeke ngangu na lo ti sara ye na lege ni.[56] Na yâ ti ambeni ye, a yeke wara IPA na yâ ti a-organe so a leke ni na lege ti circulation, na teti so IPA ayeke na mara ti kota structure ti métabolite tongaso na tryptophane, sérotonine nga na ambeni ye so alondo na indole, IPA ayeke sara kua na a-organe so ayeke sara si a-organe ti terê ti zo aga nzoni.[52] IPA alingbi ti tiri na a-métabolite so alondo na tryptophane ti wara ando so abungbi na ndo ti a-enzyme wala arécepteur, na alingbi ti buba yâ ti alege so ayeke na yâ ti tere ti zo. Ye so afa so a lingbi a kiri a manda ye na ndo ti pharmacokinetics ti lo nga na pharmacodynamique ti lo ti hinga nzoni mingi fenêtre ti kaïngo kobela ti lo.[57] A ngbâ ti bâ wala ye so alingbi nga ti si na yâ ti acellule so ayeke sara si mênë abâ gigi (HSC).
E yeda so mandango ye ti e ayeke na ambeni kpale. Ti bâ mbilimbili abungbi so andu IPA, a zi na yâ ti wungo ti azo so ayeke na kobela ti diabète ti mara 2 (T2DM). E yeda so ye so akanga lege na akota ye so e wara ti sala kusala na ni na ndo azo ti kobela so ayeke na kobela ti diabète ti mara 2 nga na kobela ti foie so ague na li ni mingi. Atâa so wungo ti IPA so ayeke na yâ ti mênë ti zo ayeke 1–10 μM [11, 20], a soro mbeni wungo ti IPA so ayeke 1 mM na lege ti wungo ti IPA so ayeke na poison pëpe [15] nga na wungo ti apoptose so ayeke kota mingi, na kangbi ayeke dä pëpe na popo ti wungo ti acellule so ayeke na yâ ti mênë ti zo. Atâa so a sara kua na a-niveau ti IPA so ayeke supraphysiologique na yâ ti étude so, a yeke wara pëpe mbeni ye so azo kue amä terê na ndö ni na ndö ti nzoni dose ti IPA [52]. Atâa so aye so e wara ayeke kota ye mingi, kota destin ti métabolisme ti IPA angbâ lakue mbeni ndo so azo ayeke gi nda ti ye dä mingi. Na ndo ni, a wara aye so e wara na ndo ti kamba so ayeke na popo ti wungo ti IPA na yâ ti mênë ti zo nga na méthylation ti ADN ti a-transcript ti foie gi pëpe na lege ti a-hématopoïétique (HSC), me nga na lege ti a-tissue ti foie. A soro ti sala kusala na a-cellule LX-2 ti zo na lege ti aye so e wara kozoni na lege ti gingo nda ti ye na ndo ti transcriptome so afa so IPA ayeke na kamba na kusala ti a-hématopoïétique (HSC) [15], na a-HSC ayeke akota cellule so ayeke mû mbage na yâ ti guengo na li ni ti kobela ti foie. A yeke wara na yâ ti foie mara ti acellule mingi, tongaso a lingbi a bâ ambeni model ti acellule tongana système ti co-culture ti acellule ti hépatocyte-HSC-immune so abungbi na caspase activation nga na kangbingo yâ ti ADN nga na lege so a yeke sara kua na ni so na popo ni a yeke wara niveau ti protéine ti manda kua ti IPA nga na sarango ye ti lo na ambeni cellule ti foie.