Article ni ayeke na yâ ti li ti tënë ti gingo nda ti ye so atene “Sarango si akeke ti legume akpengba pëpe na akobela nga na asioni nyama”, bâ a-article 5 ni kue .
Ye so ayeke sara si kobela ti fungo akeke so ayeke na yâ ti akeke ti champignon Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary asara kua na mbeni kode so ayeke na akota mbage mingi ti mû kobela na akeke nde nde so ayeke mû ndo na azo. Na yâ ti étude so, a mû lege ti sara kua na diamine L-ornithine, mbeni acide aminé so ayeke protéine pëpe so ayeke sara si ambeni acide aminé so ayeke kota ye mingi abâ gigi, tongana mbeni kode ti bango lege ti aye so ayeke sara si anyama so ayeke na yâ ti tere ti ala nga na a-biochimique ti Phaseolus vulgaris L. akiri tënë nzoni na vuru moule so Pseudootiler asara si aga na ni. A-expérience so a sara na yâ ti a-in vitro afa so L-ornithine akanga lege mingi na maïngo ti mycélium ti S. pyrenoidosa na mbeni lege so abâ lege ti dose ni. Na ndo ni, a lingbi ti sara si vuru moule aga ngangu pëpe na yâ ti aye so ayeke na yâ ti serre. Na ndo ni, L-ornithine asara si akeke so a sara kua na ni akono, ye so afa so wungo ti L-ornithine so a tara ni ayeke pëpe mbeni ye so ayeke sara sioni na akeke so a sara kua na ni. Na ndo ni, L-ornithine asara si a yeke wara a-antioxydant so ayeke na yâ ti a-enzyme pëpe (a-aphénolique so ayeke na yâ ti ngu kue nga na a-flavonoïde) nga na a-enzyme so ayeke na yâ ti a-enzyme (catalase (CAT), a-peroxydase (POX), na a-oxydase ti polyphénol (PPO)), nga a yeke sara si a-enzyme ota so ayeke na yâ ti a-enzyme so ayeke na yâ ti a-anzyme, PGRvD, na PvSOAT, PvSOAT, PvSOAT, PvSOAT, PvSOAT) abâ gigi. Na ndo ni, na yâ ti silico, a bâ so mbeni ye so a tene a yeke wara na yâ ti génétique ti S. sclerotiorum, so ayeke na yâ ti génétique ti S. sclerotiorum, so ayeke tâ nde mingi na a-oxaloacétate (SsOAH) so ayeke na yâ ti a-Aspergillus. (PlOAH) na ndo ti tënë ti bango ndo na ndo ti kua, a-domaine so a bata ni nzoni nga na topologie. Ye ti dongo bê ni ayeke so, ziango L-ornithine na yâ ti bouillon ti dextrose ti pata (PDB) asara si a yeke ngangu pëpe ti tene a sara kua na gene ti SsOAH na yâ ti a-mycélium ti S. sclerotiorum. Legeoko nga, salango kusala na L-ornithine na lege ti exogène asala si fango na gigi gene ti SsOAH na yâ ti a-mycélium ti a-champignon so a bungbi ni na yâ ti akeke so a sala kusala na ni. Na pekoni, a mû L-ornithine ti sara si acide oxalique so ayeke na yâ ti PDB nga na akeke so ayeke na kobela ni adë mingi. Na nda ni, L-ornithine ayeke sala kota kusala na yâ batango dutingo ti redox nga na yâ salango si akeke so ayeke na kobela ni asala ngangu ti bata tele ti ala. Ye so asi na yâ ti étude so alingbi ti mû maboko ti leke afini kode so ayeke sara sioni na ndo ti sese pëpe ti kanga lege na vuru moule nga ti sara si kpale so lo yeke sara na ndo ti fango alê ti kobe nga na ambeni kobe nde aga kete.
Akete nyama so ayeke vuru, so alondo na nyama ti ngonda so ayeke fâ azo, ayeke mbeni kobela so ayeke buba ye mingi, so ayeke sara si akobe ti yaka ayeke lë mingi pëpe, na a yeke sara si akobe ti yaka (Phaseolus vulgaris L.) ayeke lë mingi pëpe na ndo ti sese kue (Bolton na amba ti lo, 2006). Sclerotinia sclerotiorum ayeke mbeni oko ti akobela ti akeke so ayeke na yâ ti sese so ayeke ngangu mingi ti kanga lege na ni, na a yeke wara gbâ ti akeke ahon 600 nga lo yeke na ngangu ti sara si anyama so ayeke na yâ ti akeke ni amaï hio na mbeni lege so ayeke mbilimbili pëpe (Liang na Rollins, 2018). Na gbe ti aye so ayeke nzoni pëpe, lo yeke hon na yâ ti mbeni kota mbage ti fini ti lo, lo yeke ngbâ ti lango teti angoi mingi tongana akete ye so ayeke vuru, so ayeke ngangu, so ayeke tongana ngongoa so a iri ni ‘sclerotia’ na yâ ti sese wala tongana akete kete ye so ayeke vuru, so ayeke na poro na yâ ti mycélium wala na yâ ti ngbongboro ti akeke so kobela agbu ala (5.0). S. sclerotiorum a lingbi ti sala si a -sclérotie, so a mu lege na lo ti ngbâ na fini na yâ ti a yaka so kobela ni agbu lo teti angoi mingi na ti ngbâ na fini na ngoi ti kobela (Schwartz na amba ti lo, 2005). Sclerotia ayeke na gbâ ti akobe, alingbi ti ngbâ na yâ ti sese teti ngoi mingi, na a yeke sara kua tongana kozo ye so ayeke mû lege na akobela so ayeke si na pekoni (Schwartz et al., 2005). Na yâ ti anzoni ye, a-sclerotie ayeke sigigi na ayeke sigigi na a-spore so ayeke na yâ ti pupu so alingbi ti mû kobela na ambage kue ti keke so ayeke na nduzu, so na popo ni a yeke wara afleur, akeke wala akete keke (Schwartz et al., 2005).
Sclerotinia sclerotiorum ayeke sala kusala na mbeni kode so ayeke na akete kete ye mingi ti mû kobela na akeke so lo yeke yamba lo, na a ndu molongo ti aye so abungbi oko ti londo na tongo nda ti sclérose ti si na sigingo ti akobela. Na tongo nda ni, S. sclerotiorum ayeke sigigi na akete kete ye so ayeke na yâ ti ngu (so a iri ni ascospore) na yâ ti ambeni ye so ayeke tongana a-champignon so a iri ni apothecia, so ayeke ga na yâ ti pupu na ayeke maï ti ga akete kete ye so ayeke tambela pëpe na ndo ti akete keke so ayeke na kobela ni (Bolton na amba ti lo, 2006). Na pekoni, nyama ni ayeke sigigi na acide oxalique, mbeni ye so ayeke sara si zo awara kobela, ti tene pH ti mur ti acellule ti keke ni abuba, ti sara si enzyme ni abuba nga ti lï na yâ ti anyama ni (Hegedus na Rimmer, 2005), nga ti kanga lege na keke so ayeke mû ndo ti keke ni ti sara si a-oxydant alondo. Acidé so ayeke sara si mur ti acellule ti keke ni awoko, na a yeke mû lege na a-enzyme so ayeke buba yâ ti acellule ti champignon (CWDE) ti sara kua nzoni nga ti sara kua nzoni, na a mû lege na akobela ti hon ndo ti kpale ti tere ti zo ni ti lï na yâ ti anyama so ayeke mû ndo ni (Marciano et al., 1983). Tongana a lï na yâ ti terê ti zo awe, S. sclerotiorum ayeke sigigi na gbâ ti a-CWDE, na tapande polygalacturonase nga na cellulase, so ayeke sara si a yeke ngangu pëpe ti mû ndo na yâ ti anyama so kobela ni agbu ni nga ti sara si anyama ni akui. Akota ye so ayeke si na yâ ti tere ti zo ayeke sara si a yeke wara asioni ye so ayeke si na yâ ti tere ti zo (Hegedus na Rimmer, 2005). Na ngoi ni so, akeke so ayeke yamba azo ayeke hinga a-molécule so ayeke na yâ ti a-pathogène (PAMP) na lege ti a-récepteur so ayeke hinga a-image (PRR), na a yeke sara si molongo ti aye so ayeke sara si na nda ni a yeke sara kua ti bata terê ti zo.
Atâa so a sala angu mingi ti sala ngangu ti kanga lege na akobela, kpale ti warango germplasme so alingbi ti gbu akobela angbâ na yâ ti a-haricot, legeoko tongana ambeni kobe ti dengo buze, teti so akobela ni ayeke gbu ngangu, a yeke ngbâ na fini, na a lingbi ti gbian tele ti lo. Tongaso, salango ye na mbage ti akobela ayeke ngangu mingi na a hunda mbeni kode so abungbi aye mingi, so andu bungbingo ti asalango ye ti ngobo ti salango ye, salango ye na lege ti biologie, nga na akode ti kaïngo kobela (O’Sullivan et al., 2021). Ti sala kusala na a -chimie ti kanga lege na vuru moisissure ayeke nzoni mingi teti so a -fungicide, tongana a sala kusala na ni nzoni nga na ngoi so alingbi, alingbi ti kanga lege nzoni na kangbingo yâ ti kobela ni, ti sala si kobela ni aga ngangu pëpe, na ti sala si akobe ti yaka ni abuba pëpe. Me, salango kusala ahon ndo ni na ziango bê mingi na ndo ti akode ti fango na anyama alingbi ti sala si akete mara ti S. sclerotiorum so ayeke na ngangu ti tiri na ni asigigi na ti sala sioni na anyama so ayeke na yâ ti anyama pëpe, na nzoni duti ti sese, nga na nzoni dutingo ti ngu (Le Cointe na amba ti lo, 2016; Ceresini na amba ti lo, 2024). Tongaso, ti wara ambeni ye nde so ayeke buba pëpe ndo so e yeke dä aga mbeni kota ye.
A-polyamine (PA), tongana putrescine, spermidine, spermine, na cadavère, alingbi ti sala kusala tongana ambeni ye so ayeke mû zendo ti tiri na asioni kobela so ayeke na yâ ti akeke, na lege so, a lingbi ti sala si salango kusala na a -fungicide so ayeke sioni mingi wala pëpe (Nehela na amba ti lo, 2024; Yi20 na amba ti lo, 2 ). Na yâ ti akeke so ayeke ga, a-PA ayeke mû mbage na yâ ti gbâ ti aye so ayeke si na yâ ti tere ti zo so na popo ni a yeke wara, me gi pëpe, kangbingo yâ ti acellule, kangbingo yâ ti acellule, nga na kiringo tënë na akpale ti abiotique nga na ti biotique (Killiny na Nehela, 2020). Ala lingbi ti sala kusala tongana a-antioxydant, ti mû maboko ti zi mara ti oxygène so ayeke sala kusala (ROS), ti bata hôméostase ti redox (Nehela na Killiny, 2023), ti pusu agene so andu batango tele (Romero na amba ti lo, 2018), ti leke alege nde nde ti salango ye ti tele (Nehela na Killiny, 20). Killiny, 2019), ti leke mbeni ye so ayeke mû ngangu na zo ti tiri na akobela (SAR), nga ti leke yâ ti songo ti akeke na akobela (Nehela na Killiny, 2020; Asija na amba ti lo, 2022; Czerwoniec, 2022). A yeke nzoni ti hinga so mbilimbili kode nga na kusala ti PA na yâ batango akeke ayeke nde nde alingbi na mara ti akeke, aye so ayeke mû kobela na azo nga na aye so ayeke si na yâ ti ndo so ala yeke dä. A yeke wara na yâ ti akeke PA so ayeke kota ye mingi so a iri ni L-ornithine (Killiny na Nehela, 2020).
L-ornithine ayeke sala kusala mingi na yâ maïngo ti akeke nga na maïngo ti ala. Na tapande, ambeni gingo nda ti ye so a sala kozoni afa so na yâ ti loso (Oryza sativa), ornithine alingbi ti sala si azote akiri aga nzoni (Liu na amba ti lo, 2018), lë ti loso, nzoni ni nga na fion ni (Lu na amba ti lo, 2020), nga na kiringo tënë na kpale ti ngu (Yang na amba ti lo, 2000). Na ndo ni, salango kusala na L-ornithine na lege ti exogène asala si a yeke ngangu pëpe ti gbu ngangu na yâ ti akeke ti sucre (Beta vulgaris) (Hussein na amba ti lo, 2019) nga ti sala si kpale ti ingo so ayeke na yâ ti oignon (Allium Cepa) (Çavuşoǧlu na Çavuşoǧdaǧna12 (cavuşoǧu) na plan 2019) adë. Rocha na amba ti lo, ngu 2012). A lingbi ti sara kua na L-ornithine ti bata terê ti zo na gbele akpale ti abiotique ndali ti so lo yeke mû mbage na yâ ti bungbingo ti proline na yâ ti akeke so a sara kua na ni. Na tapande, a tene kozo awe so agene so andu sarango kua ti proline, na tapande agene ti ornithine delta aminotransférase (delta-OAT) nga na agene ti proline déhydrogénase (ProDH1 na ProDH2), ayeke mû mbage na yâ ti batango akeke ti Nicotiana benthamiana nga na ti Arabidopsis thaliana na tere ti Pse so ayeke hôte pëpe nga na ti . Mysore, ngu 2012). Na mbage, a hunda ti tene a sara kua na ornithine décarboxylase (ODC) ti tene anyama so ayeke sara si kobela amaï (Singh et al., 2020). A yeke wara na yâ ti ODC ti Fusarium f. sp. lycopersici na lege ti mbeni ye so a iri ni HIGS (HIGS) asara si akeke ti tomate alingbi ti tiri na kobela ti Fusarium (Singh na amba ti lo, 2020). Me, a manda nzoni pëpe ngangu so salango kusala na ornithine exogène alingbi ti sala na ndo ti akpale ti biologie tongana a-phytopathogène. Ye so ayeke kota mingi ayeke so, ngangu so ornithine ayeke sala na ndo ngangu ti tele nga na aye so ayeke si na yâ tele ti zo so ague oko na ni angbâ mingi pëpe.
Ti hinga ye na ndo ti kpale ti S. sclerotiorum so ayeke mû ndo na yâ ti akeke ti legume ayeke kota ye ti tene a leke anzoni kode ti kaïngo kobela ni. Na yâ ti étude so, a leke ti hinga ngangu so diamine L-ornithine alingbi ti sara tongana mbeni kota ye so ayeke sara si akeke ti legume ayeke bata terê ti ala nzoni nga ala yeke tiri na kobela ti Sclerotinia sclerotiorum. A yeke na lege ni ti tene so, na ndo ti so L-ornithine ayeke sara si akeke so ayeke na kobela ni akpengba, lo yeke sara nga mbeni kota kua ti bata na dutingo ti redox. A yeke na lege ni ti tene so L-ornithine alingbi ti sara si a leke yâ ti a-antioxydant so ayeke enzymatique nga na a-enzyme pëpe nga ti sara si a-antioxydant so ayeke sara si zo awara kobela pëpe nga na a-protéine so ayeke na terê ni. A yeke na lege ni ti tene so L-ornithine ayeke sara kua use so, na a sara si lo yeke mbeni ye so ayeke mû zendo ti sara kua na mbeni kode so ayeke ngbâ lakue ti sara si vuru nyama ti ngonda asara ngangu na ndo ti azo pëpe nga ti sara si akeke ti legume so ayeke na yâ ti akodoro mingi akpengba pëpe ti tiri na ngangu kobela ti fungo ye so. Ye so asi na yâ ti étude so alingbi ti mû maboko ti leke afini kode so ayeke sara sioni na ndo ti sese pëpe ti kanga lege na vuru moule nga ti sara si ngangu so lo yeke sara na ndo ti fango alê ti kobe aga kete.
Na yâ ti étude so, a mû mbeni mara ti kobe so a lingbi ti vo ni, so a iri ni Giza 3 (Phaseolus vulgaris L. cv. Giza 3), ti sara na mbeni ye ti tara na ni. A mû na ala na nzobe akobe so ayeke nzoni na lege ti Departement ti gingo nda ti ye na ndo ti akobe ti yaka, Ndokua ti gingo nda ti ye na ndo ti akobe ti yaka (FCRI), Ndokua ti gingo nda ti ye na ndo ti fango yaka (ARC), Égypte. A lu akobe oku na yâ ti akete bozo ti plastique (diamètre ti yâ ni ayeke 35 cm, yâ ni ayeke 50 cm) so asi singo na sese so S. sclerotiorum ayeke na yâ ni na gbe ti aye so ayeke na yâ ti serre (25 ± 2 °C, humidité relative 75 ± 1%, lumière ngbonga 8/bingo ngbonga 16). Na lango 7–10 na peko ti lungo ye (DPS), a yeke sara si akeke ni aga kete ti tene a zia gi akeke use so akono legeoko nga na akeke ota so akono kue na yâ ti sembe oko oko. A yeke tuku ngu na akeke kue so a zia na yâ ti apopo-hoto fani oko na yâ ti ayenga use na a yeke mû ngu na ala nze oko oko na wungo so a fa ndali ti mara ti keke so a mû ni.
Ti leke mbeni wungo ti 500 mg/L ti L-ornithinediamine (so a hinga ni nga na iri ti acide (+)-(S)-2,5-diaminopentanoïque; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Zamani), a zia kozoni 50 mg na yâ ti 100 mL ti ngu so a distillé ni nzoni. Na pekoni, a zia ngu na yâ ti solution ti stock ni na a sara kua na ni na yâ ti ambeni ye so a sara na pekoni. Na nduru tënë, a tara ambeni ye omene so ayeke na yâ ti L-ornithine (12,5, 25, 50, 75, 100 nga na 125 mg/L) na yâ ti a-in vitro. Na ndo ni, a mû ngu so a distillé ni nzoni pëpe tongana mbeni ye ti bango lege ti sioni ye (Mock) nga na mbeni yorö ti kango ye so a iri ni “Rizolex-T” so ayeke na poudre so a lingbi ti sukula ni 50% (toclofos-méthyl 20% + thiram 30%; tongana mbeni nzoni komandema. A tara yorö ti kango ye so a iri ni “Rizolex-T” so a yeke kä ni na yâ ti a-in vitro na a sara ni na akota wungo oku (2, 4, 6, 8 na 10 mg/L).
A mû ambeni tapande ti akeke ti haricot nga na akeke ti mburu so afa na gigi akota ye so ayeke sara si zo ayeke na vuru moule (wungo ti azo so ayeke wara kobela ni: 10–30%) na yâ ti aferme ti dengo buze. Atâa so a hinga mingi ti aye ti keke so kobela ni agbu ni na lege ti mara/mara (mara ti dengo buze so ayeke ngangu pëpe ti wara ni Giza 3), ambeni, mbilimbili ala so a wara ni na yâ ti amagazin ti kodoro ni, ayeke mara ti akeke so a hinga ni pëpe. Azo so abungbi aye so ayeke na kobela ni, a zia kozoni kue na ndo ti ala na mbeni solution ti hypochlorite ti sodium 0,5% teti penze-ngbonga ota, na pekoni a sukula ni fani mingi na ngu so a distillé ni nzoni na a sukula ni na mbeni mbeti ti filtre so ayeke stérile ti zi ngu so ahon ndo ni. Na pekoni, a fâ yâ ti ambage ti tere so ayeke na kobela ni na yâ ti akete ye so alondo na yâ ti anyama so ayeke na popo ti ala (na popo ti anyama so ayeke na nzoni seni nga na anyama so ayeke na kobela ni), a zia ni na ndo ti mbeni ye so a iri ni potato dextrose agar (PDA) na a zia ni na ndo ti 25 ± 2 °C na mbeni cycle ti lumière ti ngbonga 12/bingo ti ngbonga 12 teti lango 5 ti tene a sara si sclérotie abâ gigi. A sala nga kusala na kode ti mycélium ti sukula a-isolé ti a-champignon so alondo na yâ ti a-culture so abungbi wala so ayeke na saleté. A hinga kozoni anyama so a sukula ni awe na lege ti mara ti ala na pekoni a hinga so a yeke S. sclerotiorum na lege ti aye so a bâ na yâ ti microscope. Na pekoni, a tara a-isolé kue so a sukula ni awe ti bâ wala ala lingbi ti mû kobela na azo na ndo ti mbeni mara ti kobe so a iri ni Giza 3 so ayeke na ngangu ti wara kobela ti lingbi na atënë ti Koch.
Na ndo ni, a kiri a leke mbeni ye so a iri ni S. sclerotiorum so ayeke sara si zo awara kobela mingi (isolate #3) na lege ti mbeni ye so a iri ni interne transcription spacer (ITS) tongana ti so White na amba ti lo, 1990 afa; Baturo-Ciesniewska na amba ti lo, 2017. Na nduru tënë, a zia a-isolé na yâ ti bouillon ti dextrose ti pata (PDB) na a zia ni na ndo ti 25 ± 2 °C teti lango 5–7. Na pekoni, a bungbi mycélium ti a-champignon, a fâ yâ ni na yâ ti mbeni bongo ti fromage, a sukula ni fani use na ngu so ayeke stérile, na a sara si a sukula ni na mbeni mbeti ti filtre so ayeke stérile. A mû ADN ti génétique ni na lege ti mbeni ye so a iri ni Quick-DNATM (Kuramae-Izioka, 1997; Atallah na amba ti lo, 2022, 2024). Na pekoni, a leke yâ ti rDNA ti ITS na lege ti mbeni mbilimbili couple ti akozo ye so ayeke na yâ ti ITS1/ITS4 ( Baturo-Ciesniewska et al., 2017 ). A mû aproduit ti PCR so a sukula ni awe ti tene a sara séquence na ndo ni (Co., Ltd.). A leke a-ADN ti ITS na lege ti kode ti séquencing ti Sanger. Na pekoni, a haka molongo ti ahundango tënë so a bungbi ni na afini sango so ayeke na yâ ti GenBank nga na Centre national d’information sur la biotechnologie (NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/) na lege ti logiciel BLASTn. A haka molongo ti ahundango tënë ni na ambeni mara ti S. sclerotiorum 20 so a wara ni na yâ ti afini sango so ayeke na yâ ti NCBI GenBank (Tableau S1 ti mungo maboko) na lege ti ClustalW na yâ ti Paquet ti gingo nda ti ye na ndo ti génétique ti évolution moléculaire (MEGA-11; version 11) (Kumar na amba ti lo, 20). A sara kua na kode ti maximum probabilité nga na model ti substitution ti nucléotide so ayeke kiri na peko na yâ ti ngoi (Nei na Kumar, 2000). A fa keke so ayeke na kota log-likelihood. A yeke kozoni ti tene a soro keke ti gingo nda ti ye na lege ti heuristique na lege ti sorongo keke so ayeke na kota log-likelihood na popo ti keke ti bungbingo avoizin (NJ) (Kumar et al., 2024) na keke ti parsimony so ayeke kota mingi (MP). A leke keke ti NJ na lege ti mbeni matrice ti yongo ti azo use so a diko ni na lege ti mbeni model so ayeke kiri na peko ti ngoi (Nei na Kumar, 2000).
A yeke wara na yâ ti anyama ni aye so a iri ni L-ornithine nga na yorö so ayeke fâ asioni nyama “Rizolex-T” na lege ti kode ti diffusion ti agar. Kode ti salango na kusala: A mû wungo ti L-ornithine so alingbi na ni (500 mg/L) na a mélangé ni nzoni na 10 ml ti ngu ti PDA ti leke na a -solution so ayeke na ndangba wungo ti 12,5, 25, 50, 75, 100 na 125 mg/L, oko oko. A mû na ala akota ye oku so a iri ni “Rizolex-T” (2, 4, 6, 8 na 10 mg/L) nga na ngu so a distillé ni awe so ayeke stérile ti bâ na ni. Na peko ti so medium ni akpengba awe, a mû mbeni fini bouchon ti mycélium ti culture ti Sclerotinia sclerotiorum, so diamètre ni ayeke 4 mm, na a zia ni na yâ ti bozo ti Petri na a zia ni na yâ ti 25±2°C juska mycélium ni akanga ndo ti bozo ti Petri ti bango ndo na ndo ni kue, na pekoni a sû na mbeti maïngo ti a-champignon ni. Calculé wungo ti azo so ayeke na yâ ti radial ti S. sclerotiorum na lege ti équation 1:
A kiri a sala ye ni fani use, na a sala a-réplique ti biologie omene teti groupe ti bango ndo/ti tara oko oko nga na apopo-hoto oku (akeke use na yâ mbeni poto oko oko) teti a-réplique ti biologie oko oko. A gi nda ti aréplique biologique oko oko fani use (aréplique use ti senda-ye) ti hinga wala a yeke tâ tënë, a lingbi ti zia bê na ndo ni nga a lingbi ti kiri ti sara kua na a-expérience ni. Na ndo ni, a sala kusala na régression ti probit ti diko wungo ti akota ye so ayeke na yâ ti mênë ti zo (IC50) nga na IC99 (Prentice, 1976).
Ti bâ ngangu ti L-ornithine na yâ ti aye so ayeke na yâ ti serre, a sara a-expérience use na yâ ti apopo-hoto so aga na peko ti mba. Na nduru tënë, a zia na yâ ti apopo-hoto ni sese so a sara ni na argile nga na mbutu (3:1) na a zia na yâ ti ni mbeni fini culture ti S. sclerotiorum so a leke ni awe. Kozoni, a zia na yâ ti S. sclerotiorum (isolate #3) mbeni ye so ayeke sara si zo awara kobela mingi na lege so a fâ yâ ti mbeni sclérotium oko na popo ni, a zia ni na lê ti lo na sese na ndo ti mbeni PDA na a zia ni na ndo ti 25°C na yâ ti bingo so ayeke lakue dä (ngbonga 24) teti lango 4 ti tene a sara si mycélium ni akono. Na pekoni, a mû a-agar osio so diamètre ni ayeke 5 mm na yâ ti yanga ti ngu ni na a zia na yâ ni 100 g ti mbeni mélange ti blé na ti loso so ayeke stérile (1:1, v/v) na a zia na yâ ti a-flacon ni kue na 25 ± 2 °C na gbe ti mbeni cycle ti 12 h ti lumière/12 h ti vukongo ndo ti scotiler teti 5. A bungbi aye so ayeke na yâ ti akete bozo ni kue nzoni ti tene a duti oko kozoni si a zia sese dä. Na pekoni, a zia 100 g ti mênë ti colonisation ti bran na yâ ti akopo oko oko ti tene a ngbâ lakue ti wara gbâ ti asioni ye so ayeke mû kobela na zo. A mû ngu na yâ ti apopo-hoto so a zia yorö na yâ ni ti tene a-champignon ni akono na a zia ni na yâ ti mbeni ndo so a iri ni serre teti lango 7.
Na pekoni, a lu angongoa oku ti mara ti Giza 3 na yâ ti akopo oko oko. Ti apopo-hoto so a sala kusala na L-ornithine nga na yorö ti futingo akota nyama Rizolex-T, a zia kozoni akobe so a sala si a stérilisé ni pëpe teti angbonga use na yâ ti mbeni ngu so abungbi aye use so na mbeni ndangba wungo ti IC99 so ayeke ndulu na 250 mg/L na 50 mg/L, na pekoni a sala si a sukula ni na pupu teti ngbonga oko. Na mbeni mbage nde, a yôro angongoa ni na yâ ti ngu so a distillé ni nzoni pëpe tongana mbeni ye ti bango lege ti sioni ye. Na peko ti lango 10, kozoni si a tuku ngu na ndo ni kozoni, a yeke zi akeke ni kete, na a zia gi akete keke use so ayeke nzoni na yâ ti sembe oko oko. Na ndo ni, ti tene a wara kobela ti S. sclerotiorum, a fâ akeke ti haricot so ayeke na oko ngoi ti maïngo ni (lango 10) na ando use so ayeke nde nde na lege ti mbeni bistouri so a stérilisé ni awe na a zia ndulu na 0,5 g ti mélange ti bran colonisant na yâ ti place ti kä oko oko, na pekoni a zia na yâ ti plan ti maïngo ti kobela ni kue mbeni kota ngu-nzapa. A fâ akeke ti bango ndo na ndo ni legeoko tongaso na a zia mbeni wungo so alingbi tele (0,5 g) ti mélange ti bran so ayeke stérile, so a sala colonisation na ni pëpe na yâ ti place ti kä ni na a bata ni na gbe ti kota ngu-nzapa ti sala si ndo ni aga nzoni teti maïngo ti kobela na ti tene a sala ye alingbi na popo ti agroupe ti kaïngo kobela.
Kode ti salango ye: A mû ngu na akeke ti haricot na 500 ml ti mbeni ngu ti L-ornithine (250 mg/l) wala ti fungicide Rizolex-T (50 mg/l) na ziango ngu na ndo ni, na pekoni a kiri a sala kusala na ni fani ota na popo ti lango 10. A mû na azo so a mû na ala placebo ngu so a distillé ni stérile 500 ml. A sala kusala na a-opération kue na gbe ti aye so ayeke na yâ ti serre (25 ± 2°C, 75 ± 1% ti humidité relative, na mbeni ngoi ti lumière so ayeke 8 h ti lumière/16 h ti bingo). A yeke mû ngu na apopo-hoto kue yenga use oko oko na a yeke sala kusala na ni nze oko oko na mbeni engrais NPK so ayeke na lege ni (20-20-20, so ayeke na 3,6% ti soufre nga na akete kete ye ti TE; Zain Seeds, Egypte) na mbeni wungo ti 3–4 g/l na lege ti ziango ngu na ndo ti akeke ni alingbi na awango so a mû na azo so asala ni. Tongana a fa mbeni ye nde pëpe, a bungbi akeke so akono awe (2e na 3e akeke so alondo na nduzu) na yâ ti a-réplique biologique oko oko na ngbonga 72 na peko ti so a sara kua na ni (hpt), a sara si a ga homogénéisé, a bungbi ni na a bata ni na -80 °C ti tene a sara ambeni analyse nde so na popo ni a yeke wara, me gi pëpe, a-indicateur ti peroxydation locale ti li oxidation, histochimique . na a-antioxydant so ayeke enzymatique pëpe nga na a-expression ti agene.
A yeke bâ ngangu ti kobela ti vuru moisissure yenga oko oko na yâ ti lango 21 na peko ti so a mû yorö na zo (dpi) na lege ti mbeni échelle ti 1–9 (Tableau supplémentaire S2) so aluti na ndo ti échelle ti Petzoldt na Dickson (1996) so Teran na amba ti lo achangé ni. (2006). Na nduru tënë, a bâ akeke nga na amaboko ti akeke ti haricot ti to nda ni na ndo so a zia yorö dä ti mû peko ti guengo na li ni ti asioni ye so ayeke na yâ ti a-internode nga na a-node. Na pekoni, a mû yongo ti lesion ni so alondo na ndo so a zia yorö dä ti si na ndo so ayeke yongoro mingi na ndo ti keke ni wala na ndo ti maboko ni na a mû na lo mbeni score ti 1–9 so aluti na ndo ti ndo so lesion ni ayeke dä, na ndo so (1) afa so mbeni ye ti bango ni ayeke dä pëpe so ayeke nduru na ndo so a zia yorö dä nga (2–9) afa so lesion ni ayeke gue na li ni yeke yeke a noppnolong noudes na Tableau S2). Na pekoni, a gbian ngangu ti kobela ti vuru moule ti ga pourcentage na lege ti formule 2:
Na ndo ni, a leke ndo so ayeke na gbe ti courbe ti guengo na li ni ti kobela (AUDPC) na lege ti formule (Shaner na Finney, 1977), so a leke ni ade ti ninga pëpe teti vuru futingo ti akobe ti yaka (Chauhan na amba ti lo, 2020) na lege ti équation 3:
Na ndo so Yi = ngangu ti kobela na ngoi ti ti, Yi+1 = ngangu ti kobela na ngoi ti peko ti+1, ti = ngoi ti kozo mesure (na yâ ti alango), ti+1 = ngoi ti mesure ti peko (na yâ ti alango), n = wungo ti a-heure wala a-observation kue. A sû na mbeti aye so afa so akeke ti bean akono, so na popo ni a yeke wara yongo ti keke ni (cm), wungo ti amaboko ti keke oko oko, nga na wungo ti akeke ti keke oko oko yenga oko oko teti lango 21 na yâ ti aréplique biologique kue.
Na yâ ti aréplique biologique oko oko, a mû ambeni échantillon ti akeke (use na ota akeke so akono kue so alondo na li ni) na lango 45 na peko ti so a sara kua na ni (lango 15 na peko ti ndangba yorö ni). A-réplique biologique oko oko ayeke na akete bozo oku (akeke use na yâ ti bozo oko oko). A mû ndulu na 500 mg ti nyama so a pete ni ti zi na a -pigment ti fotosynthèse (chlorophylle a, chlorophylle b na caroténoïde) na salango kusala na 80% ti acétone na 4 °C na yâ ti bingo. Na peko ti ngbonga 24, a mû a-échantillon ni na a bungbi ngu so ayeke na ndo ni ti hinga wungo ti chlorophylle a, chlorophylle b nga na caroténoïde so ayeke na yâ ni na lege ti mbeni spectrophotomètre UV-160A (Shimadzu Corporation, Japon) alingbi na kode ti (Lichtenthaler ti mesurengo ye nde nde7 na1) . a yeke wara na yâ ni (A470, A646 na A663 nm). Na pekoni, a sala kusala na aformule 4–6 so Lichtenthaler (1987) afa na gigi wungo ti akota ye so ayeke na yâ ti fotosynthèse.
Na 72 h na peko ti so a sara kua na ni (hpt), a bungbi akeke (use na ota akeke so akono kue awe so alondo na li ni) na yâ ti a-réplique biologique oko oko ti tene a sara kua na ni ti sara na localisation histochimique in situ ti peroxyde ti hydrogène (H2O2) nga na ti anion ti superoxyde (O2•−). A-réplique biologique oko oko ayeke na akete bozo oku (akeke use na yâ ti bozo oko oko). A gi nda ti aréplique biologique oko oko na lege ti fä use (aréplique use ti senda-ye) ti hinga wala kode ni ayeke tâ tënë, a lingbi ti zia bê na ndo ni nga a lingbi ti kiri ti sala kusala na ni. A yeke wara na yâ ti ambeti ti e ambeni ye so a iri ni 0,1% ti 3,3′-diaminobenzidine (DAB; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Allemagne) wala tétrazolium nitrobleu (NBT; (2004) na Adam na amba ti lo. (1989) na ambeni kete gbiango ye na yâ ni. Ti hinga ndo so H2O2 ayeke dä na lege ti histochimie, a zia na yâ ti akete mbeti ni 0,1% ti DAB na yâ ti tampon ti Tris 10 mM (pH 7,8) na pekoni a zia ni na yâ ti lumière teti penze-ngbonga 60. A zia akete mbeti ni na yâ ti 0,15% (v/v) ti TCA na yâ ti éthanol:chloroforme 4:1 (v/v) (Al-Gomhoria, Caire, Égypte) na pekoni a zia ni na yâ ti lumière juska a ga bingo. Legeoko nga, a zia na yâ ti a-valve ni mbeni tampon ti phosphate ti potassium 10 mM (pH 7,8) so ayeke na 0,1 w/v % ti HBT ti tene a sara kua na histochimie ti O2•− na yâ ti ndo ni. A zia akete mbeti ni na yâ ti lumière so ayeke na température ti chambre teti penze-ngbonga 20, na pekoni a sara si a ga bleu tongana ti so a fa na nduzu ge, na a zia lumière na ndo ni juska ambeni ye so ayeke bleu/violet asigigi. A bâ ngangu ti couleur so aga na pekoni so ayeke brun (tongana mbeni ye so afa H2O2) wala bleu-violet (tongana mbeni ye so afa O2•−) na lege ti version ti Fidji ti paquet ti lekengo na a-image ImageJ (http://fiji.sc; a wara ni na lango 7 ti mars 2024).
A leke malondialdehyde (MDA; tongana mbeni ye so ayeke fa so mafuta ti tere ti zo ayeke sara kua nzoni) na lege ti kode ti Du na Bramlage (1992) so a changé ambeni kete ye na yâ ni. A bungbi akeke ti biologique oko oko (use na ota akeke so akono kue so alondo na nduzu) 72 h na peko ti so a sala kusala na ni (hpt). Na yâ ti biologie oko oko, a yeke wara apopo-hoto oku (akeke use na yâ ti apopo-hoto oko oko). A gi nda ti aréplique biologique oko oko na lege ti fä use (aréplique use ti senda-ye) ti hinga wala kode ni ayeke tâ tënë, a lingbi ti zia bê na ndo ni nga a lingbi ti kiri ti sala kusala na ni. Na nduru tënë, a mû 0,5 g ti ngbongboro keke ti sese ti zi na MDA na acide trichloroacétique 20% (TCA; MilliporeSigma, Burlington, MA, États-Unis) so ayeke na 0,01% ti hydroxytoluène butylé (BHT; Sigma-Aldrich, St. Na pekoni, a hinga wungo ti MDA so ayeke na yâ ti ngu so ayeke na ndo ti ngu ni na lege ti mbeni ye so a iri ni spectrophotomètre UV-160A (Shimadzu Corporation, Japon) na a fa ni tongana nmol g−1 FW.
Ti bâ wala a yeke wara a-antioxydant so ayeke enzymatique pëpe nga na a-enzyme, a bungbi akeke (use na ota akeke so akono kue awe so alondo na li ni) na yâ ti a-réplique biologique oko oko na ngbonga 72 na peko ti so a sara kua na ni (hpt). A-réplique biologique oko oko ayeke na akete bozo oku (akeke use na yâ ti bozo oko oko). A bâ échantillon ti biologie oko oko na yâ ti ambeti use (a-échantillon use ti senda-ye). A fâ yâ ti akeke use na azote so ayeke ngu-ingo na a sala kusala na ni droit ti hinga na a-antioxydant so ayeke na yâ ti enzyme nga na so ayeke na yâ ti enzyme pëpe, wungo ti acide aminé kue, wungo ti proline so ayeke na yâ ni, fango na gigi agene nga na wungo ti oxalate.
A yeke wara na yâ ti ambeti ti e ambeni ye so a iri ni Folin-Ciocalteu (Sigma-Aldrich, St. (ngu 1999). Na nduru tënë, a mû ndulu na 0,1 g ti nyama ti keke so a homogénéisé ni na 20 ml ti méthanol 80% na yâ ti bingo teti ngbonga 24 na a bungbi ngu so ayeke na ndo ni na peko ti so a sala centrifugation. 0,1 ml ti échantillon ni a bungbi ni na 0,5 ml ti réactif ti Folin-Ciocalteu (10%), a yengi ni teti 30 s na a zia ni na yâ ti bingo teti penze-ngbonga 5. Na pekoni, a zia na yâ ti tube oko oko 0,5 ml ti ngu so a iri ni carbonate de sodium 20% (Na2CO3; Société ti yorö na ti kaïngo kobela ti Al-Gomhoria, Caire, Égypte), a mélangé ni nzoni na a zia ni na ndo so dê ayeke dä pëpe na yâ ti bingo teti ngbonga 1. Na peko ti so a zia na yâ ti ngu ni, a mû mbeni ye so a iri ni spectrophotomètre UV-160A (Shimadzu Corporation, Japon) ti bâ na lege ti 765 nm. A yeke wara na yâ ti a-échantillon ni mbeni courbe ti étalonnage ti acide gallique (Fisher Scientific, Hampton, NH, États-Unis) na a fa ni tongana milligramme ti acide gallique so alingbi na gramme oko oko ti fini kilo (mg GAE g-1 fini kilo).
A yeke wara na yâ ti a-flavonoïde so ayeke na yâ ti ngu ni kue aye so Djeridane na amba ti lo asara. (2006) na ambeni kete gbiango ye na yâ ni. Na nduru tënë, a mû 0,3 ml ti méthanol so ayeke na nduzu ge na a mélangé ni na 0,3 ml ti chlorure ti aluminium 5% (AlCl3; Fisher Scientific, Hampton, NH, États-Unis), a sara si a ngbâ ti ngbâ na yâ ti chambre teti penze-ngbonga 5, na pekoni a zia na yâ ni a% ti mssiumta10. (Al-Gomhoria, Caire, Égypte), a mélangé ni nzoni na a zia ni na yâ ti chambre teti penze-ngbonga 30 na yâ ti bingo. Na peko ti so a zia na yâ ti ngu ni, a mû mbeni ye so a iri ni spectrophotomètre UV-160A (Shimadzu Corporation, Japon) ti bâ na lege ti 430 nm. A fa wungo ti a-flavonoïde kue so ayeke na yâ ti a-échantillon so a mû ni na lege ti mbeni courbe ti étalonnage ti rutine (TCI Amérique, Portland, OR, États-Unis) na pekoni a fa ni tongana milligramme ti rutine so alingbi na gramme oko oko ti fini kilo (mg RE g-1 fini kilo).
A yeke wara na yâ ti ambeti ti e ambeni ye so a iri ni réactif ninhydrin so a changé ni (Thermo Scientific Chemicals, Waltham, MA, États-Unis) so aluti na ndo ti kode so Yokoyama na Hiramatsu (2003) afa nga so Sun na amba ti lo achangé ni. (2006). Na nduru tënë, a mû 0,1 g ti nyama ti sese na mbeni tampon so ayeke na pH 5,4, na a zia 200 μL ti ngu so ayeke na ndo ni na yâ ti 200 μL ti ninhydrine (2%) nga na 200 μL ti pyridine (10%; Spectrum Chemical, Nouveau-Brunswick, NJ, États-Unis), na a zia ni na yâ ti mbeni baol ti min3. a mû mesure ni na 580 nm na lege ti mbeni ye so a iri ni UV-160A (Société Shimadzu, Japon). Na mbage, a yeke wara proline na lege ti kode ti Bates (Bates na amba ti lo, 1973). A mû proline na 3% ti acide sulfosalicylique (Thermo Scientific Chemicals, Waltham, MA, États-Unis) na peko ti so a sara si a zia na yâ ti centrifugation, a mélangé 0,5 ml ti ngu so ayeke na ndo ti ngu ni na 1 ml ti acide acétique glacial (Fisher Scientific, Hampton, NH, États-Unis) nga na mbeni réactif ti ninhydrine so a sara ni na co-assuré na min°9. na 520 nm na salango kusala na oko spectrophotomètre so ayeke na nduzu ge. A yeke wara na yâ ti a-étalonnage ti glycine nga na ti proline (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, États-Unis), na a fa ni tongana mg/g ti fini poids.
Ti hinga kusala ti enzyme so ayeke sara si terê ti zo aga nzoni, a mû ndulu na 500 mg ti nyama so a sara si terê ti zo aga oko, na a mû 3 ml ti tampon ti Tris so ayeke na 50 mM (pH 7,8) so na yâ ni a yeke wara 1 mM ti EDTA-Na2 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, États-Unis), a zia na yâ ti centrifuge na 10 000 × g teti penze-ngbonga 20 na gbe ti frigo (4 °C), na a bungbi ngu so ayeke na ndo ni (a yeke wara na yâ ti enzyme ni bruit) (El-Nagar na amba ti lo, 2023; Osman na amba ti lo, 2023). Na pekoni, a mû na Catalase (CAT) 2 ml ti tampon ti phosphate ti sodium 0,1 M (pH 6,5; Sigma-Aldrich, St. 2023; Osman na amba ti lo, 2023). A yeke wara na yâ ti a-enzyme so ayeke sara si a-enzyme so ayeke na yâ ti ngu (POX) abâ gigi na lege ti kode ti Harrach na amba ti lo. (2009). (2008) na akete gbiango ye (El-Nagar na amba ti lo, 2023; Osman na amba ti lo, 2023) nga na kusala ti enzyme ti polyphénol oxidase (PPO) so a fa ni na peko ti so a sala kusala na 2,2 ml ti tampon ti phosphate ti sodium 100 mM (pH ti gua1TCcal 6,0l), 2,0 ml. Portland, OR, États-Unis) na 100 μl ti H2O2 12 mM. A leke kode ni kete na (El-Nagar na amba ti lo, 2023; Osman na amba ti lo, 2023). A yeke na lege ni ti tene a sara kua na 3 ml ti ngu ti catéchol (Thermo Scientific Chemicals, Waltham, MA, États-Unis) (0,01 M) so a leke ni fini fini na yâ ti mbeni tampon ti phosphate 0,1 M (pH 6,0). A yeke na lege ni ti tene a sara kua na CAT ti bâ lege so H2O2 ayeke buba na 240 nm (A240), a yeke wara POX na lege ti bango lege ti guengo na li ni ti absorption na 436 nm (A436), nga a yeke PPO na lege ti enregistrement ti akota changement ti absorption na 495 nm oko oko (A4095 u30) . mbeni ye ti bango na lumière (Shimadzu, Japon).
A sala kusala na RT-PCR na ngoi ti tâ ye ti hinga na wungo ti agene ota so andu a-antioxydant, so na popo ni a yeke wara catalase ti peroxysome (PvCAT1; No. Accession No. KY195009.1), na yâ ti akeke ti haricot (use na ota akeke so akono kue so alondo na nduzu) 72 h na peko ti ndangba salango ye ni. Na nduru tënë, a zi ARN na lege ti mbeni ye so a iri ni Simply P Total ARN (Cat. No. BSC52S1; BioFlux, Technologie Biori, Chine) alingbi na ye so azo so asara ni afa. Na pekoni, a leke ADN na lege ti Kit ti lekengo ADN ti TOP scriptTM alingbi na afango lege ti azo so asara ni. A zia iri ti akozo ye so ayeke na yâ ti a-gene ota so ayeke na nduzu ge na yâ ti Tableau S3 ti supplément. A yeke wara na yâ ti mbeti ni atënë so a iri ni PvActin-3 (numéro ti lingo na yâ ti GenBank: XM_068616709.1) so a sara kua na ni ti bata na da nga na lege ti kode ti 2-ΔΔCT (Livak na Schmittgen, 2001). A fa so actin ayeke ngbâ lakue na gbe ti akpale ti biotique (bungbingo tele so alingbi pëpe na popo ti akeke ti legume so ayeke mingi na anyama ti ngonda Colletotrichum lindemuthianum) nga na akpale ti abiotique (hungo ngu, ngu-ingo, ndowa so ayeke na gbe ni) (Borges et al., 2012).
A yeke na lege ni ti tene so, na yâ ti angu so ahon, a sara kua na mbeni ye so a iri ni BLAST (BLASTp 2.15.0+) (BLASTp 2.15.0+) (Altschul na amba ti lo, 1997, 2005). Na nduru tënë, a mû OAH so alondo na Aspergillus fijiensis CBS 313,89 (AfOAH; taxide: 1191702; numéro ti GenBank XP_040799428,1; a-acide aminé 342) nga na Penicillium lagena (PlOAH2; taxide1bank:99). XP_056833920.1; 316 acides aminés) tongana a-échantillon ti hundango tënë ti sara na carte ti poroso so ayeke na yâ ti S. sclerotiorum (taxide: 5180). A sala BLASTp na ndo ti asango ti génome ti S. sclerotiorum so ayeke na yâ ti GenBank na ndo ti site ti Centre national d’information sur la biotechnologie (NCBI), http://www.
Na ndo ni, a yeke wara na yâ ti ambeti ti e ambeni ye so afa so gene ti OAH so ayeke na yâ ti S. sclerotiorum (SsOAH) nga na a-analyse ti évolution nga na keke ti phylogénèse ti AfOAH so alondo na A. fijiensis CBS 313.89 nga na PlOAH so alondo na P. lagena ayeke sara kua na kode ti sarango na kua na yâ ti matrice ti JTamura11, na JTamura11. tapande (Jones na amba ti lo, 1992). A bungbi keke ti phylogénèse ni na lege ti gingo nda ti aye mingi so abâ lege ti a-protéine ti a-OAH kue so a fa kozoni awe (SsOAH) so alondo na S. sclerotiorum nga na lege ti hundango tënë na lege ti mbeni ye so a iri ni Constraint-Based Alignment (COBALT; na ngu 2007). Na ndo ni, a leke a-acide aminé so ayeke nzoni mingi ti SsOAH so alondo na S. sclerotiorum ti lingbi na a-acide ti hundango tënë (AfOAH na PlOAH) (Larkin na amba ti lo, 2007) na lege ti ClustalW (a yeke wara na yâ ti a-outil ti bango ndo na ndo ti aye so a leke ni). ESPript (version 3.0; na ndo ti site ti e).
Na ndo ni, a leke a-domaine ti kusala so a fa kozoni awe nga na ando so a bata ni ti S. sclerotiorum SsOAH na yâ ti asewa nde nde na lege ti kusala ti InterPro (Blum na amba ti lo, 2021). Na pekoni, a sara kua na mbeni ye so a iri ni Moteur de reconnaissance de homologie/analogie des protéines (version 2.0 de serveur Phyre2; 2015) na a sara kua na serveur ti SWISS-MODEL (Biasini na amba ti lo, 2014). Azo so a fa tënë ti ala na yâ ti ambeti ota (format PDB) abâ gigi na lege ti sarango kua na paquet ti UCSF-Chimera (version 1.15; https://www.cgl.ucsf.edu/chimera/ ) (Pettersen na amba ti lo, 2004).
A yeke na lege ni ti tene e sara kua na PCR ti hinga wungo ti aye so ayeke na yâ ti a-oxaloacétate acétylhydrolase (SsOAH; numéro ti accession ti GenBank: XM_001590428.1) so ayeke na yâ ti a-mycélium ti Sclerotinia sclerotiorum. Na nduru tënë, a zia S. sclerotiorum na yâ ti mbeni bozo so PDB ayeke na yâ ni na a zia ni na yâ ti mbeni incubateur so ayeke yengi (modèle: I2400, Co. Na pekoni, a sala kusala na a-cellule ni na L-ornithine nga na yorö ti futingo nyama Rizolex-T na ndangba wungo ti IC50 (ndulu na 40 na 3,2 mg/L, na lege ti mbaï) na pekoni a bata ni teti ambeni ngbonga 24 na gbe ti oko ye so. Na peko ti so a zia na yâ ti ngbongboro ni, a zia na yâ ti centrifuge aculture ni na 2500 rpm teti penze-ngbonga 5 na a bungbi ye so ayeke na ndo ni (mycélium ti champignon) ti bâ wala a yeke sara kua na agene. Legeoko nga, a bungbi mycélium ti a-champignon na 0, 24, 48, 72, 96, na 120 h na peko ti so kobela ni agbu ala na yâ ti akeke so kobela ni agbu ala so asara si avuru moisissure nga na mycélium ti coton abâ gigi na ndo ti anyama so kobela ni agbu ala. A zi ARN na yâ ti mycélium ti a-champignon ni na pekoni a leke cDNA tongana ti so a fa na nduzu ge. A yeke wara na yâ ti Tableau S3 a-aprimeur ti SsOAH. SsActin (numéro ti lï na yâ ti GenBank: XM_001589919.1) a yeke sara kua na ni tongana gene ti batango da, na a yeke sara kua na kode ti 2-ΔΔCT (Livak na Schmittgen, 2001).
A wara acide oxalique na yâ ti bouillon ti dextrose ti pata (PDB) nga na a-échantillon ti akeke so ayeke na yâ ti anyama so ayeke mû kobela na azo na lege ti kode ti Xu na Zhang (2000) so a sara ambeni kete changement dä. Na nduru tënë, a zia a-isolé ti S. sclerotiorum na yâ ti akete bozo so PDB ayeke na yâ ni na pekoni a zia ala na yâ ti mbeni incubateur so ayeke yengi (modèle I2400, Nouveau-Brunswick Scientific Co., Edison, NJ, États-Unis) na 150 rpm na 25 ± 2 °C (ti tene a ngbâ lakue ti dü) Na peko ti so a zia na yâ ti ngbongboro nyama ni, a zia kozoni kue na yâ ti mbeti ti filtre ti Whatman #1 na pekoni a zia na yâ ti centrifuge na 2500 rpm teti penze-ngbonga 5 ti zi tanga ti mycélium ni. A bungbi ngu so ayeke na ndo ti ngu ni na a bata ni na 4°C ti tene a hinga wungo ti oxalate ni. Ti leke na a-échantillon ti akeke, a zi ndulu na 0,1 g ti akete kete ye ti yâ ti akeke fani ota na ngu so a distillé ni (2 ml na ngoi oko oko). Na pekoni, a sara si a-échantillon ni aga centrifugé na 2500 rpm teti penze-ngbonga 5, a sara si ngu so ahon na ndo ni ahule na lege ti mbeti ti filtre ti Whatman No. 1 na a bungbi ni ti tene a kiri a bâ ni nzoni.
Ti hinga wungo ti acide oxalique, a leke a-échantillon ni na yâ ti mbeni tube so a kanga ni na verre na yâ ti molongo so: 0,2 ml ti échantillon (wala filtrat ti culture ti PDB wala solution ti acide oxalique so ayeke na lege ni), 0,11 ml ti bleu ti bromphénol (BPB, 1 mM; Fisher Chemical, MPA1, USA9 m0l). acide (H2SO4; Al-Gomhoria Pharmaceutiques et fournitures médicales, Caire, Egypte) na 0,176 ml ti dichromate ti potassium 100 mM (K2Cr2O7; a-appareil ti chimie ti TCI, Portland, OR, États-Unis), na pekoni a zia na yâ ti ngu ni mbeni ye so a iri ni 4,8 ml. na yâ ti mbeni ngu so dê ni ayeke 60 °C. Na peko ti penze-ngbonga 10, a zia na yâ ti réaction ni 0,5 ml ti hydroxyde ti sodium (NaOH; 0,75 M). A yeke wara na yâ ti a-étude ni mbeni ye so a iri ni spectrophotomètre UV-160 (Shimadzu Corporation, Japon) so ayeke mû lege na zo ti bâ ndo na ndo ti aye so ayeke na yâ ti ngu ni (A600). A sala kusala na PDB na ngu so a distillé ni tongana aye ti bango lege ti wungo ti afiltrat ti culture nga na a-échantillon ti akeke, na lege ti mbaï. A yeke wara na yâ ti afiltre ti culture ni wungo ti acide oxalique so ayeke na yâ ti millilitre oko ti ngu ti PDB (μg.mL−1), nga na yâ ti akete kete ye so a zi na yâ ti akeke, so a fa ni na lege ti mbeni microgramme ti acide oxalique na yâ ti gramme ti fini poids (μg.g.g−1 FW), na lege ti mbeni étalonnage ti acide oxalique curvetham, Étalonnage ti acide oxalique curvetham, MA, na États-Unis).
Na yâ ti étude ni kue, a leke a-expérience kue na yâ ti mbeni design so a leke ni kue na lege ti mbana (CRD) so a sara ni na a-réplique ti biologie omene na yâ ti mbeni yorö oko oko nga na a-poto oku na yâ ti a-épiderme ti biologie oko oko (akeke use na yâ ti mbeni poto oko oko) gi tongana a fa mbeni ye nde. A gi nda ti aréplique ti biologie na yâ ti aréplique use (aréplique ti technique use). A sala kusala na a-réplique ti senda-ye ti bâ wala a lingbi ti kiri ti sala kusala na oko ye so a sala me a sala kusala na ni pëpe na yâ ti gingo nda ti ye ti statistique ti kpe a-réplique ti wataka. A yeke na lege ti statistique la a sara kua na mbeni ye so a iri ni analyse de variance (ANOVA) na pekoni a sara kua na test ti Tukey-Kramer so afa so mbeni ye ayeke nde (p ≤ 0,05). Ti a-expérience so a sara na yâ ti a-in vitro, a sara kua na IC50 na IC99 na lege ti model ti probit na a sara kua na 95% ti a-interval ti confiance.
A bungbi a-isolé osio na yâ ti akota yaka ti soja nde nde na yâ ti Gouvernement ti El Ghabiya, na Égypte. Na ndo ti PDA, a-isolé kue ayeke sigigi na mbeni vuru mycélium so ayeke tongana crème so hio aga vuru tongana coton (Foto 1A) na pekoni a ga beige wala brun na ngoi so a yeke sclérotium. Mingi ni, a-sclérotie ayeke ngangu, a yeke vuko, a yeke spherique wala a yeke mbilimbili pëpe, yongo ni ayeke 5,2 ti si na 7,7 mm nga diamètre ni ayeke 3,4 ti si na 5,3 mm (Foto 1B). Atâa so a-isolé osio abâ gigi na mbeni fä ti sclérotie na yanga ti ndo ti culture ni na peko ti so a zia ala na yâ ti lango 10–12 na ndo ti 25 ± 2 °C (Fig. 1A), wungo ti sclérotie na yâ ti aplaque oko oko ayeke nde mingi na popo ti ala (P < 0,001), na wungo ti sclérotie ni ayeke mingi mingi (P < 0,001). 1,53 ti sclérose na yâ ti aplaque oko oko; Legeoko nga, a-isole #3 asala si acide oxalique mingi na yâ ti PDB ahon ambeni isole ni (3,33 ± 0,49 μg.mL−1; Fig. 1D). Isolate #3 afa mara ti aye so ayeke na yâ ti tere ti zo nga na aye so ayeke na yâ ti microscope so ayeke na yâ ti anyama so ayeke sara si kobela asara zo. Na tapande, na ndo PDA, acolonie ti isolate #3 akono hio, a yeke vuru tongana crème (Foto 1A), a yeke beige na peko wala a yeke jaune-brun ti saumon so aza, na a hunda lango 6-7 na 25 ± 2°C ti tene a kanga ndo ti mbeni plaque so diamètre ni ayeke 9 cm. Na lege ti aye so a fa na nduzu ge na ndo ti tere ti zo nga na aye so lo bâ na yâ ti microscope, a hinga so isolé #3 ayeke Sclerotinia sclerotiorum.
A yeke wara na yâ ti akobe ti yaka ti S. sclerotiorum so a zi ni nde na yâ ti akeke ti legume. (A) Maïngo ti mycélium ti a-isolé osio ti S. sclerotiorum na ndo ti ngu ti PDA, (B) sclérose ti a-isolé osio ti S. sclerotiorum, (C) wungo ti a-sclérose (na yâ ti mbeni plaque oko oko), (D) sigingo ti acide oxalique na ndo ti ngu ti PDB (μg.mL−1), nga (E) wungo ti akobela so ayeke na ndo ti S. cultivar ti legume ti dengo buze so ayeke ngangu pëpe ti wara ni Giza 3 na gbe ti aye so ayeke na yâ ti serre. A-valeur ni afa moyenne ± SD ti aréplique biologique oku (n = 5). Alettre nde nde afa so akota kangbi ayeke na popo ti akode ti kaïngo kobela (p < 0,05). (F–H) A yeke wara na yâ ti akeke ti bongo so ayeke na ndo ti sese nga na akeke ti silique, lango 10 na peko ti so a mû na ala yorö so a iri ni isolate #3 (dpi). (I) A sala kusala na kode ti gingo nda ti ye na ndo ti ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro ngbongboro 20 20 so a wara na lege ti base de données ti Centre national d’information sur la biotechnologie (NCBI) (httbihps://lvwwwm.). A-numéro so ayeke na ndo ti akete ligne ti bungbingo ye ni afa wungo ti azo so ayeke na yâ ti kodoro ni (%), na wungo so ayeke na gbe ti akete ligne ti bungbingo ye ni afa yongo ti filiale ni.
Na ndo ni, ti fa so kobela ni ayeke mû ndo, a mû a-isolate osio ti S. sclerotiorum so a wara ni ti zia na yâ ti mara ti akobe ti dengo buze so ayeke na ngangu ti wara kobela, Giza 3, na yâ ti aye so ayeke na yâ ti serre, ye so ague oko na atënë ti Koch (Fig. 1E). Atâa so a-isolé ti champignon kue so a wara ayeke na kobela na alingbi ti mû kobela na a-haricot vert (cv. Giza 3), na a sara si a yeke wara a-image ti vuru moisissure na ndo ti ambage kue so ayeke na nduzu (Fig. 1F), mbilimbili na ndo ti akeke (Fig. 1G) nga na a-pod ti inoculation (Fig. 1H) na ndo ti 1000. aggressif isolé na yâ ti a-expérience use so ayeke nde. Isolate 3 ayeke na kota ngangu ti kobela (%) na ndo ti akeke ti haricot (24,0 ± 4,0, 58,0 ± 2,0, na 76,7 ± 3,1 na lango 7, 14, na 21 na peko ti so kobela ni agbu zo; Tapande 1F).
A yeke wara nga na yâ ti mbeti ni ambeni ye so a iri ni S. sclerotiorum isolate #3 so ayeke sara si zo awara kobela mingi (ITS) (Fig. 1I). Azo so abâ lege ti phylogénie na popo ti isolate #3 na a-isolé/souche ti référence 20 afa so ala yeke na kota mara ti ye (>99%) na popo ti ala. A yeke nzoni ti hinga so S. sclerotiorum #3 (533 bp) ayeke na kota kamba na S. sclerotiorum ti Amerika LPM36 so a zi ni na yâ ti akobe ti pois so ahule (numéro ti accession ti GenBank MK896659.1; 540 bp) nga na S. OR206374.1; 548 bp), so ayeke sara si akeke ti violet (Matthiola incana) abuba, na a bungbi ala kue nde nde na li ti keke ni (Foto 1I). A zia fini molongo ti aye so na yâ ti base ti asango ti NCBI na a zia iri ni na ndo ni “Sclérotinie sclérotiorum – isolé YN-25” (numéro ti lï na yâ ti GenBank PV202792). A lingbi ti bâ so isolate 3 ayeke isolate so ayeke sala ngangu na ndo azo mingi; tongaso, a soro isolate so ti manda ye na ndo ni na yâ ti a-expérience kue so aga na pekoni.
A yeke wara na yâ ti ambeti ti e ambeni ye nde nde (12,5, 25, 50, 75, 100 na 125 mg/L) so ayeke sara si anyama so ayeke na kobela ti S. A yeke nzoni ti hinga so L-ornithine ayeke sara kua ti kaïngo kobela na yeke yeke a yeke kanga lege na akota nyama ti S. sclerotiorum ti maï na mbeni lege so abâ gi wungo ti yorö so a mû na zo (Foto 2A, B). Na yâ ti akota ye so a tara ni (125 mg/L), L-ornithine afa so a yeke ga na akota ye ti kanga lege na maïngo ti mycélium (99,62 ± 0,27%; Tapande 2B), so alingbi na yorö ti kango ye so a iri ni Rizolex-T so a yeke kä ni na yâ ti amagazin) (ayeke kanga lege na akota ye ti tengo ni 99,39% Figure 2B; (10 mg/L), so afa so mara ti ngangu tongaso ayeke sala kusala.
Na yâ ti ambeni ye, a yeke wara L-ornithine so ayeke sara si anyama so ayeke na kobela ti sclérotinie sclérotiorum abâ gigi. (A) A haka kusala ti kaïngo kobela ti L-ornithine so ayeke na yâ ti akete kete ye nde nde so ayeke na yâ ti S. sclerotiorum na yorö so a yeke kä ni na yâ ti amagazin, so iri ni ayeke Rizolex-T (10 mg/L). (B, C) A yeke kanga lege na (%) ti kono yâ ti mycélium ti S. sclerotiorum na peko ti so a mû na lo akota yorö nde nde so a iri ni L-ornithine (12,5, 25, 50, 75, 100 na 125 mg/L) wala Rizolex-T (2, 4, 6, 8 na 10 mgly). A-valeur ni afa moyenne ± SD ti aréplique biologique oku (n = 5). Alettre nde nde afa kangbi so ayeke na popo ti akode ti kaïngo kobela (p < 0,05). (D, E) A yeke na lege ni ti tene e sara kua na L-ornithine nga na yorö so a yeke kä ni na yâ ti amagazin so iri ni ayeke Rizolex-T. A fa ligne ti régression ti model ti probit tongana mbeni ligne ti bleu so akpengba, na a fa intervalle ti confiance (95%) tongana mbeni ligne ti rouge so a tracé ni.
Na ndo ni, a sara kua na régression probit na a fa a-image so alingbi na ni na yâ ti Tableau 1 nga na a-image 2D,E. Na nduru tënë, ngere ti pente so a yeda na ni (y = 2,92x − 4,67) nga na akota wungo so ague oko na ni (Cox & Snell R2 = 0,3709, Nagelkerke R2 = 0,4998 na p < 0,0001; Tapande 2D) ti L-ornithine afa so mbeni ye so ayeke sara si zo awara kobela ti S. a yeke wara na yâ ti ambeti ti e ambeni ye so a iri ni Rizolex-T (y = 1,96x − 0,99, Cox & Snell R2 = 0,1242, Nagelkerke R2 = 0,1708 et p < 0,0001) (Tableau 1).
A yeke wara na yâ ti ambeti ti e ambeni ye so ayeke sara si a yeke ngangu na azo ti wara kobela ti S. sclerotiorum.
Na yâ ti aye kue, L-ornithine (250 mg/L) asara si vuru moule so ayeke na yâ ti akeke ti kongo le-kobe so a sara kua na ni pëpe adë mingi tongana a haka ni na akeke so a sara kua na ni pëpe (contrôle; Figure 3A). Na nduru tënë, atâa so ngangu ti kobela ti akeke so a sara kua na ni pëpe ayeke gue na li ni yeke yeke (52,67 ± 1,53, 83,21 ± 2,61, na 92,33 ± 3,06%), L-ornithine asara si kobela ni akiri na peko mingi (%) na yâ ti ngoi kue so a sara na experiment ni (8,0 ±0,01). 1,00, na 26,36 ± 3,07) na lango 7, 14, na 21 na peko ti so a mû yorö ni (dpt), na lege ti mbaï (Foto 3A). Legeoko nga, tongana a mû na akeke ti mburu so ayeke na kobela ti S. sclerotiorum 250 mg/L ti L-ornithine, ndo so ayeke na gbe ti courbe ti guengo na li ni ti kobela ni (AUDPC) alondo na 1274,33 ± 33,13 na yâ ti azo so a mû yorö na ala pëpe ti si na 281,03 ± 7,95 so ayeke na gbe ti mg/0L ti lumière. Rizolex-T ayeke mbeni yorö so ayeke fâ azo (183,61 ± 7,71; fig. 3B). A bâ nga oko ye so na yâ ti use tara ni.
A yeke na lege ni ti tene e sara kua na L-ornithine ti sara si anyama ti ngonda so ayeke na vuru vurungo ye so ayeke na yâ ti Sclerotinia sclerotiorum aga na yâ ti a-événement ti serre. (A) Courbe ti guengo na li ni ti kobela ti vuru moisissure ti kongo le-kobe na peko ti so a mû na lo 250 mg/L ti L-ornithine. (B) Ndo so ayeke na gbe ti courbe ti guengo na li ni ti kobela (AUDPC) ti vuru moisissure ti kobe ti commun na peko ti so a sala kusala na L-ornithine. A-valeur ni afa moyenne ± SD ti aréplique biologique oku (n = 5). Alettre nde nde afa so akota kangbi ayeke na popo ti akode ti kaïngo kobela (p < 0,05).
Tongana a mû L-ornithine 250 mg/L na lege ti exogène, yeke yeke a yeke sara si keke ni akono (Fig. 4A), wungo ti amaboko ti keke oko oko (Fig. 4B), nga na wungo ti akeke oko oko (Fig. 4C) na peko ti lango 42. Na ngoi so yorö ti kango ye so a iri ni Rizolex-T (50 mg/L) ayeke sara ngangu mingi na ndo ti aparamètre kue ti kobe so a manda, salango kusala na exogène ti 250 mg/L ti L-ornithine ayeke na use kota ngangu tongana a haka ni na azo so a sala kusala na ala pëpe (Fig. 4A–C). Na mbage, yorö ti L-ornithine asala ngangu pëpe na ndo ti wungo ti a-pigment ti photosynthèse so ayeke chlorophylle a (Fig. 4D) na chlorophylle b (Fig. 4E), me a sara si wungo ti caroténoïde kue so ayeke na yâ ti ngu ni ague na li ni kete (0,56 ± 0,03 mg2 ±03 mg2 fr wt) tongana a haka ni na azo so ayeke na yâ ti groupe ti azo so ayeke na kobela ni pëpe (0,0). a yeke nzoni ti tene e sara kua na 0,46 ± 0,02 mg/g ti poids; fig. 4F). Na ndo ni kue, aye so asi afa so L-ornithine ayeke pëpe mbeni ye so ayeke sara sioni na akeke so a sara yorö na ni na a lingbi même ti sara si ala maï.
A yeke na lege ni ti tene e sara kua na L-ornithine so ayeke na yâ ti a-exogène ti sara si akeke ti mburu akono nga na a-pigment ti photosynthèse ti akeke ti mburu so a wara kobela ti Sclerotinia sclerotiorum na yâ ti a-événement ti serre. (A) Kota ti keke (cm), (B) Wungo ti amaboko ti keke oko oko, (C) Wungo ti akeke ti keke oko oko, (D) Wungo ti chlorophylle a (mg g-1 fr wt), (E) Chlorophylle b (mg g-1 fr wt), (F) Wungo ti caroténoïde kue (mg g-1 fr). A-valeur ni ayeke moyenne ± SD ti aréplique biologique oku (n = 5). Alettre nde nde afa so akota kangbi ayeke na popo ti akode ti kaïngo kobela (p < 0,05).
Na ngoi so a yeke sara kua na L-ornithine (250 mg/L) na lege ti exogène, a yeke wara mara ti oxygène so ayeke sara kua (ROS; so a fa ni tongana peroxyde d’hydrogène [H2O2]) nga na a-radical libre (so a fa ni tongana anion ti superoxyde [O2•−]) so afa so tongana a sara kua na L-ornithine (250 mg/L) na lege ti exogène, a yeke sara si abungbi ti H2O (250 mg/L) adë mingi. nmol.g−1 FW; Fig. 5A) na O2•− (32,69 ± 8,56 nmol.g−1 FW; Fig. 5B) so a haka ni na bungbingo ti akeke use so a sala kusala na ni pëpe (173,31 ± 12,06 na 149,35 ± 7,94 nmol ti F−ive na W. mg/L ti yorö ti kango ye so a iri ni Rizolex-T (170,12 ± 9,50 na 157,00 ± 7,81 nmol.g−1 fr wt, na lege ti mbaï) na ngbonga 72. Ga na H2O2 na O2•− so abungbi na gbe ti hpt (Fig. 5A, B). Legeoko nga, a-étude so a sara na lege ti TCA afa so akeke ti mburu so ayeke na kobela ti S. sclerotiorum abungbi gbâ ti MDA (113,48 ± 10,02 nmol.g fr wt) na yâ ti akeke ti ala (Fig. 5C). Me, salango kusala na L-ornithine na lege ti exogène asala si peroxydation ti lipidi adë mingi tongana ti so a fa na lege ti guengo na li ni ti wungo ti MDA na yâ ti akeke so a sala kusala na ni (33,08 ± 4,00 nmol.g fr wt).
Effet ti L-ornithine exogène na ndo ti akota marque ti stress oxidatif nga na akode ti batango terê so ayeke enzymatique pëpe na yâ ti akeke ti haricot so a wara kobela ti S. sclerotiorum na yâ ni na ngbonga 72 na peko ti so a mû kobela na zo na gbe ti aye so ayeke na yâ ti serre. (A) Peroxyde d’hydrogène (H2O2; nmol g−1 FW) na 72 hpt, (B) anion ti superoxyde (O2•−; nmol g−1 FW) na 72 hpt, (C) malondialdéhyde (MDA; nmol g−1 FW) na 72 hpt, (D) wungo ti aphénol so ayeke na yâ ti ngu (72 hpt) (E) wungo ti a-flavonoïde so ayeke na yâ ti ngu (mg RE g−1 FW) na 72 hpt, (F) wungo ti a-acide aminé so ayeke na yâ ti ngu (mg g−1 FW) na 72 hpt, nga (G) wungo ti proline so ayeke na yâ ti ngu (mg g−1 FW) na 72 hpt. A-valeur ni afa moyenne ± déviation standard (moyenne ± SD) ti a-réplique biologique 5 (n = 5). Alettre nde nde afa so akota kangbi ayeke na popo ti akode ti kaïngo kobela (p < 0,05).